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CAR-T细胞疗法可以靶向识别表达在肿瘤细胞表面的抗原，特异性杀伤肿瘤细胞，近年来已经成为肿瘤免疫疗法的研究热点。而以HER2为靶点的CAR-T细胞免疫治疗策略发展缓慢，目前仅有少量Ⅰ期和Ⅱ期的临床报道，尚未有被FDA批准的产品。本研究以抗HER2单链抗体为靶向分子，构建靶向HER2的CAR慢病毒表达质粒，使用第三代慢病毒包装系统，通过磷酸钙沉淀辅助多质粒共转染HEK293T细胞，包装制备CAR慢病毒颗粒lenti-car，并以有限稀释法测定制备的慢病毒滴度。再用慢病毒感染人外周血单核细胞(PBMC)，获得HER2靶向的CAR-T细胞，并分析其对HER2阳性和阴性肿瘤细胞的特异性抑制效果。 研究结果表明，在同样效靶细胞比等处理条件下，构建的HER2靶向CAR-T细胞对HER2阳性的人卵巢癌细胞株SK-OV-3的生长抑制率为(58.47±1.72)％，显著高于不表达CAR的空白慢病毒感染的对照T细胞组(P＜0.05);而对HER2阴性的人慢性髓原白血病细胞株K562的生长抑制率为(11.74±2.37)％，与对照组无显著差异(P＞0.05)。初步证明本文构建的CAR-T细胞对于HER2阳性肿瘤细胞可产生显著的生长抑制效果，具有HER2靶向性。 为进一步验证本研究构建CAR-T细胞的作用靶点为HER2，消除不同种类细胞株对CAR-T细胞毒性可能存在的敏感性差异，本研究将HER2表达质粒perbB2-EGFP转染HER2阴性的K562，使其表达HER2蛋白。HER2靶向CAR-T细胞对HER2阳性K562的生长抑制率上升为(30.41±7.59)％，较HER2阴性K562具有明显差异(P＜0.05)。进一步证明本研究构建的HER2靶向的第二代CAR-T细胞可选择性的抑制高表达HER2蛋白的肿瘤细胞的生长。 基于本课题组前期研究基础，超抗原是一类在极低浓度下，就能激活体内大量的淋巴细胞，产生极强的免疫应答反应的物质，具有显著的免疫增强活性，但缺乏靶向性。本研究将具有靶向性的CAR-T细胞与超抗原SEC2相结合，验证超抗原在CAR-T制备过程中的作用，以及对CAR-T细胞杀伤肿瘤细胞的影响。 研究结果显示，超抗原显著提高慢病毒感染效率，有利于CAR-T细胞的制备。另外，加入超抗原时，CAR-T对HER2阳性的SK-OV-3生长抑制率为(79.15士2.52)％，对于HER2阴性的K562生长抑制率为(45.53±3.37)％，对表达HER2的K562生长抑制率为(65.41±6.99)％，都显著高于不加超抗原时的生长抑制率(P＜0.05），体现出超抗原和CAR-T的协同抗肿瘤作用。结果表明，超抗原SEC2通过其较强的免疫激活能力从而对肿瘤细胞的生长产生显著的抑制作用，该作用可与CAR-T细胞协同，增强CAR-T细胞的靶向性肿瘤抑制能力。超抗原SEC2的协同有望作为一种新的CAR-T细胞治疗辅助方法，增强临床上实体瘤的免疫细胞治疗效果。