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目的本研究以非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1975、A549细胞株为研究对象。通过比较阿司匹林、奥希替尼单独作用与两药联合应用对H1975、A549细胞株增殖、凋亡及蛋白表达水平的影响。验证联合用药较单独用药是否存在增强抗肿瘤效果及两药对肿瘤的增殖抑制是否具有协同作用,并对其相关的机制进行初步探讨,这将为非小细胞肺癌的治疗和防治提供理论基础。方法MTT比色法检测非小细胞肺癌H1975细胞株经不同浓度阿司匹林(1、2.5、5、7.5、10、12.5、15 mmol/L)和奥希替尼(0.05、0.1、0.5、1、5、10、50μmol/L)及非小细胞肺癌A549细胞株经不同浓度阿司匹林(1、2.5、5、10、20 mmol/L)和奥希替尼(0.5、1、5、10、50μmol/L)分别作用24 h、48 h、72 h后的吸光度值,计算阿司匹林和奥希替尼单独应用对H1975、A549细胞的增殖抑制率。选择5μmol/L奥希替尼分别与(2.5、5.0、7.5 mmol/L)阿司匹林联合作用H1975细胞48 h,5μmol/L奥希替尼分别与(2.5、5.0、10.0 mmol/L)阿司匹林联合作用A549细胞48 h,测定吸光度值,计算阿司匹林联合奥希替尼对H1975、A549细胞的增殖抑制率,用金氏公式判断两药联合应用对细胞的增殖抑制是否有协同作用。Hoechst33342染色观察阿司匹林和奥希替尼单独及联合用药H1975细胞核的形态学变化。Annexin V-FITC/PI染色法检测阿司匹林和奥希替尼单独及联合用药对H1975细胞凋亡情况的影响,计算H1975细胞的凋亡率。Western blot法检测阿司匹林和奥希替尼单独及联合应用对H1975细胞Bcl-2、Bax、Cox-2、NF-κB蛋白表达的影响,初步探讨阿司匹林联合奥希替尼诱导H1975细胞凋亡的机制。复方阿司匹林和奥希替尼片剂的制备。筛选处方,按照最佳制片工艺条件进行复方片剂的制备,并按照《中国药典》片剂检查项下相关规定进行检查。结果MTT结果显示不同浓度阿司匹林和奥希替尼单独应用对H1975细胞增殖有明显的抑制作用且呈浓度依赖性(P<0.05),随时间的增加,抑制作用更加明显。不同浓度阿司匹林单独应用对A549细胞增殖有明显的抑制作用且呈浓度依赖性(P<0.05),随时间的增加,抑制作用更加明显。不同浓度奥希替尼单独应用对A549细胞增殖没有明显的抑制作用(P≥0.05)。阿司匹林和奥希替尼联合用药对比于两药单独应用对H1975细胞的增殖抑制具有协同作用(Q>1.15)。阿司匹林联合奥希替尼比于两药单独用药对A549细胞的增殖抑制没有协同作用(Q<1.15)。Hoechst33342染色荧光倒置显微镜下观察H1975细胞发现阿司匹林和奥希替尼单独及联合用药镜下可见大量凋亡小体,细胞核呈致密浓染,联合用药效果更加显著。Annexin V-FITC/PI染色法检测发现阿司匹林和奥希替尼单独及联合用药均能诱导H1975细胞凋亡,且药物联合作用细胞的凋亡率明显高于单独用药,联合用药具有协同作用(Q>1.15)。Western blot结果显示阿司匹林和奥希替尼单独及联合处理H1975细胞,Bcl-2、Cox-2、NF-κB蛋白表达水平逐渐降低,阿司匹林联合奥希替尼作用比两药单独作用降低更加明显(P<0.05)。Bax蛋白的表达水平逐渐升高,阿司匹林联合奥希替尼作用比两药单独作用升高更加明显(P<0.05)。复方阿司匹林和奥希替尼片剂的制备,验证了处方工艺的可行性,质量检查符合标准,达到既定要求。结论阿司匹林、奥希替尼单独及联合用药能够抑制非小细胞肺癌H1975的增殖,联合用药有显著的增强作用,且具有协同抑制作用。阿司匹林联合奥希替尼对比于单独用药对A549细胞增殖抑制没有显著的增强作用,阿司匹林联合奥希替尼对A549细胞增殖抑制没有协同作用。阿司匹林与奥希替尼联合用药对非小细胞肺癌H1975细胞的凋亡具有协同促进作用,可能与两者协同调节Bax、Bcl-2、Cox-2和NF-κB的表达有关。阿司匹林联合奥希替尼为临床联合用药及防治非小细胞肺癌的有效方案提供理论依据。