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黄瓜(Cucumis sativus L.)口感爽脆、用途广泛,是一类以温室栽培为主的蔬菜,生长状况易受环境及土壤影响,霜霉病为黄瓜主要的易感病害之一。霜霉威(Propamocarb)为一类内吸型杀菌剂,具有低毒性、半衰期短等特点,防治霜霉病效果良好。然而喷施霜霉威容易引起黄瓜体内霜霉威残留过高,引发新的食品安全问题。因此,黄瓜低农残的相关研究对提升黄瓜的品质和食用安全性意义重大。课题组前期通过对低农药残留品系‘D0351’进行转录组的测序,筛选得到了一个霜霉威胁迫下表达量明显下降的CsDREB1。推测CsDREB1为调控黄瓜农残的重要转录因子,通过调控其他基因发挥作用。本文通过克隆、表达模式分析、亚细胞定位等分子生物学。研究成果如下:(1)通过PCR技术成功克隆出CsDREB1的CDS序列,长度是603bp,编码200个氨基酸,包含一段63个氨基酸组成的AP2结构域,是AP2超级家族成员之一。(2)通过生物信息学方法预测该基因理论分子量22.26KD,属于不稳定亲水蛋白,无明显信号肽,无明显跨膜区域。黄瓜CsDREB1与甜瓜CmDREB1D之间的亲缘关系近,CsDREB1属于DREB-A1亚组。(3)通过qPCR对CsDREB1在不同品种、不同时间不同组织中表达模式进行分析。研究发现,在霜霉威胁迫下,CsDREB1在农残品系‘D0351’的表达量低于高农残品系‘D9320’;与对照组相比,霜霉威胁迫下‘D0351’中CsDREB1的表达量明显下降,‘D9320’中CsDREB1的表达量无明显变化;对CsDREB1在不同时间下的的表达模式进行了分析,未发现时间特异性;对CsDREB1在不同部位中的表达模式进行了分析,发现CsDREB1主要的差异表达部位是果实。(4)向拟南芥原生质体中导入CsDREB1与绿色荧光蛋白(GFP)融合产物,通过激光共聚焦显微镜观察发现,CsDREB1编码的蛋白定位在细胞核上,是核蛋白,CsDREB1主要在细胞核中发挥转录因子功能。(5)构建pBI121-CsDREB1植物过表达载体,通过花序侵染法将CsDREB1导入到野生型拟南芥中。对野生型拟南芥和转基因拟南芥分别进行霜霉威胁迫(浓度为2mmol.L-1霜霉威的MS培养基)。观察发现,对照组中,转基因拟南芥和野生型拟南芥的萌发率和根长无明显变化;在霜霉威胁迫下,转基因拟南芥的萌发率和根长明显低于野生型拟南芥。说明CsDREB1可以响应霜霉威的胁迫,CsDREB1过表达拟南芥植株对霜霉威的耐性明显降低。(6)通过分析其他胁迫下CsDREB1的表达模式,发现在脱落酸、高盐、干旱和多主棒孢霉菌处理下的CsDREB1的表达量明显降低,在茉莉酸处理下CsDREB1的表达量明显升高。(7)通过农杆菌介导法将CsDREB1导入黄瓜高农残品系‘D9320’中,经PCR确认获得11株CsDREB1转基因植株,收获其F1代黄瓜种子。