Th1/Th2细胞因子及部分生化指标在山羊发情周期、妊娠早期和流产前后动态变化的研究

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课题主要研究Th1/Th2细胞因子及部分生化指标在山羊发情周期、妊娠早期及流产前后的动态变化。分析细胞因子及生化指标的变化规律,探讨其生理学意义,为提高山羊繁殖效率及胚胎移植妊娠率提供理论依据。选择25只临床健康发情周期正常的经产未孕白山羊母羊为试验动物,第三次自然发情后本交配种,21只妊娠。于发情周期第1、2、3、7、10、14、17、19d,妊娠第0、1、3、5、8、11、15、18、20、26、30、40、50、60d颈静脉采集外周血液,分离血清。于发情周期第1、7、14、19d采集血液的同时采集子宫液,生理盐水5倍稀释,离心后分离上清液。应用ELISA方法检测TNF-α、IL-2、IL-10含量,生物化学法检测血清中NO、Ca、Pi、AKP、GPT及UN的含量。结果表明,在发情周期,TNF-α在发情第1~14d含量依次升高,第17、19d逐渐降低。IL-2含量从发情第1~10d持续增加,第14d开始下降,第19d稍有回升。IL-10含量在发情第1~3d逐渐降低,第7d升高,后又开始逐渐降低,第17d降至发情周期最低点,第19d回升。NO在山羊发情开始的第1~3d有所上升,后开始下降,从第14d有所回升;在妊娠早期,血清中TNF-α和IL-2含量先升高后降低。IL-10含量在妊娠早期持续上升。妊娠早期血清中NO含量逐渐上升;妊娠早期血清中TNF-α与IL-2的含量变化趋势相似,二者变化趋势与IL-10相反。NO在妊娠早期含量变化与TNF-α、IL-2相反,与IL-10相似;山羊发情周期各生化指标除NO外,含量从发情第1~19d基本无明显变化;在妊娠早期,血清Ca、UN含量从妊娠第0~60d逐渐降低。血清Pi、AKP、GPT含量从妊娠第0~60d平缓上升;山羊发情周期血清中TNF-α、IL-2和IL-10含量均极显著低于子宫液中含量(P<0.01),血清与子宫液中细胞因子变化趋势基本一致,达到显著相关。山羊血清中细胞因子含量可以间接反映出子宫液中细胞因子表达水平的变化趋势。从21只妊娠羊中随机选择8只,于妊娠第60d时分别颈部肌肉注射PG0.2mg/只,隔24h再注射0.1mg/只,结果,在第二次注射PG12~24h内,8只试验羊全部发生流产,流产率100%。于注射PG前和流产第1、3、8、10d采集外周血液,分离血清。通过对流产前后样本的检测(方法同上),结果表明,TNF-α含量在流产后极显著高于流产前含量(P<0.01),流产第1、3d逐渐升高,第8、10d逐渐降低。IL-2含量在流产后均显著高于流产前含量(P<0.05),在流产第1、3、8d逐渐升高,第10d仅稍见回落。IL-10含量在流产后显著低于流产前含量(P<0.05或P<0.01),流产第1~10d依次降低。NO含量在流产后均显著高于流产前含量(P<0.05),流产第1、3d逐渐升高,第8、10d稍降低。Ca含量除流产第1d外,流产第3、8、10d含量均高于流产前含量,但差异不显著(P>0.05),Ca含量在流产第1~10d逐渐升高。Pi含量在流产后均显著低于流产前含量(P<0.05),在流产第1~10d逐渐升高。血清AKP含量在流产后均极显著低于流产前含量(P<0.01),在流产第1~10d逐渐降低。GPT含量在流产后低于流产前含量,差异显著或不显著(P>0.05或P<0.05),在流产第1~10d逐渐降低。UN含量在流产后显著高于流产前含量(P<0.05),在流产第1~10d逐渐升高。
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