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【目的】B细胞来源的淋巴瘤是淋巴瘤中最常见的一种类型,而免疫治疗在该类型淋巴瘤的治疗中具有重要的作用;编码肿瘤相关抗原腺病毒载体感染树突状细胞（Dendritic cells,DC）是一种很有前景的肿瘤疫苗。然而,目前常用的5型腺病毒载体感染DC的效率较低。本研究的目的在于比较5型和5/35型腺病毒载体感染DC的效率,并在此基础上克隆小鼠CD20（mCD20）基因、构建编码mCD20的5/35型腺病毒载体（Ad5/35 mCD20）,并鉴定其表达产物,为编码CD20基因的5/35型腺病毒载体修饰DC作为一种B细胞淋巴瘤的免疫基因治疗手段提供实验依据和前期的基础。【方法】从健康人外周血单个核细胞中培养DC,用不同病毒滴度的Ad5 EGFP或Ad5/35 EGFP感染DC,用流式细胞仪双染色,检测EGFP的表达,比较两型不同的腺病毒载体感染DC的效率。运用分子克隆技术,从C57BL/6小鼠中克隆小鼠CD20,经PCR、酶切进行鉴定并测序正确后,将该基因cDNA片段插入腺病毒穿梭质粒pDC315中,构建pDC315 mCD20。采用Ad MaxTM腺病毒载体包装体系,将pDC315mCD20与含35型腺病毒纤维的腺病毒骨架质粒通过磷酸钙沉淀法共转染至293细胞中,经反复扩增、纯化获得Ad5/35 mCD20。将鉴定后的Ad5/35mCD20转染至HepG2细胞中,经抗鼠CD20单克隆抗体染色,通过流式细胞技术检测CD20的表达。【结果】用每个细胞100、50和10 pfu的Ad5 EGFP或Ad5/35 EGFP感染人DC,经流式细胞仪CD11a-PE和EGFP双染色,其感染效率分别为28.41%,17.36%,3.22%and69.12%,49.03%,36.89%。从C57BL/6小鼠克隆的mCD20 cDNA经测序证实与GeneBank提供的序列（No.M62541）完全一致。Ad5/35mCD20转染HepG2细胞24h,流式细胞仪检测其表达为38.72%。【结论】两型腺病毒载体感染DC的效率与病毒感染的滴度成正比,滴度愈大其感染DC的效率愈高;在相同的病毒滴度时,5/35型腺病毒载体感染DC的效率明显地高于5型腺病毒载体。将小鼠CD20基因插入E1区缺失的5/35型腺病毒载体构建的Ad5/35 mCD20能有效地表小鼠CD20蛋白,为后续研究编码CD20基因的5/35型腺病毒载体修饰DC作为B细胞淋巴瘤免疫基因治疗的一种手段提供一种有用的工具。