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由于外界环境的复杂多变,为保证生长发育的正常进行,植物通过不断地进化已经产生了一系列应答各种外界变化的机制。植物中的类受体激酶(Receptor-like kinases, RLKs)就可以感知胞外信号,然后将其传递至胞内,通过磷酸化级联反应进一步调控下游相关基因的表达,从而对外界刺激做出应答。到目前为止,已从植物中分离得到许多类受体激酶基因。凝集素类受体激酶(Lectin receptor-like kinases,LecRLKs)属于植物类受体激酶中的第二大亚家族,该家族许多成员的生理功能仍然未知。本文选取了拟南芥L型-LecRLKs家族成员LecRKIII.2作为研究对象,得到如下研究结果:
(1)跨膜区域分析发现,LecRKIII.2在300bp附近存在跨膜结构域,属于典型的跨膜蛋白。启动子区域分析结果表明LecRKIII.2启动子区域存在多个激素应答元件、非生物胁迫调控元件与光响应调控元件,这暗示该基因可能在激素、逆境胁迫和光信号通路方面可能发挥一定作用。
(2 )通过PCR法鉴定了缺失突变体Salk_010738和过表达植株LecRKIII.2-OX,大量扩种后用于后续研究。定量PCR检测LecRKIII.2的组织表达模式,发现LecRKIII.2在不同部位表达量差异较大,其中,在果荚中表达量最高,其次是茎,而在根、叶和花中的表达量偏低,推测该基因主要调控拟南芥种子和茎的发育。
(3)对拟南芥幼苗进行GA、IAA、BL、PEG8000溶液、热激和冷处理后,发现除热处理外(先下降后上升),LecRKIII.2的表达量呈现先上升后下降的趋势,这初步表明LecRKIII.2基因可能参与上述植物激素信号通路或逆境胁迫途径。
(4)在不同浓度的NaCl或甘露醇处理下,过表达植株与野生型相比种子萌发率更高,缺失突变体的萌发率却低于野生型。这说明LecRKIII.2基因增强了拟南芥植株在萌发期对NaCl、甘露醇等胁迫的耐受性。
(5)通过对拟南芥野生型Col-0、缺失突变体Salk_010738和过表达植株LecRKIII.2-OX的根长表型观察,发现过表达植株根长比野生型长,初步表明LecRKIII.2可能在拟南芥根的发育中起到一定的调控作用。使用不同浓度IAA处理发现,高浓度的IAA对过表达植株的抑制程度大于野生型,说明该基因过表达增强了拟南芥感知生长素的能力。生长素相关基因定量分析说明LecRKIII.2基因能够影响拟南芥中部分生长素相关基因的表达,它们在过表达植株中对生长素的响应程度高于野生型。
(6)通过原核表达,获得LecRKIII.2基因的激酶区域蛋白,为后续研究LecRKIII.2蛋白的功能奠定基础。
(1)跨膜区域分析发现,LecRKIII.2在300bp附近存在跨膜结构域,属于典型的跨膜蛋白。启动子区域分析结果表明LecRKIII.2启动子区域存在多个激素应答元件、非生物胁迫调控元件与光响应调控元件,这暗示该基因可能在激素、逆境胁迫和光信号通路方面可能发挥一定作用。
(2 )通过PCR法鉴定了缺失突变体Salk_010738和过表达植株LecRKIII.2-OX,大量扩种后用于后续研究。定量PCR检测LecRKIII.2的组织表达模式,发现LecRKIII.2在不同部位表达量差异较大,其中,在果荚中表达量最高,其次是茎,而在根、叶和花中的表达量偏低,推测该基因主要调控拟南芥种子和茎的发育。
(3)对拟南芥幼苗进行GA、IAA、BL、PEG8000溶液、热激和冷处理后,发现除热处理外(先下降后上升),LecRKIII.2的表达量呈现先上升后下降的趋势,这初步表明LecRKIII.2基因可能参与上述植物激素信号通路或逆境胁迫途径。
(4)在不同浓度的NaCl或甘露醇处理下,过表达植株与野生型相比种子萌发率更高,缺失突变体的萌发率却低于野生型。这说明LecRKIII.2基因增强了拟南芥植株在萌发期对NaCl、甘露醇等胁迫的耐受性。
(5)通过对拟南芥野生型Col-0、缺失突变体Salk_010738和过表达植株LecRKIII.2-OX的根长表型观察,发现过表达植株根长比野生型长,初步表明LecRKIII.2可能在拟南芥根的发育中起到一定的调控作用。使用不同浓度IAA处理发现,高浓度的IAA对过表达植株的抑制程度大于野生型,说明该基因过表达增强了拟南芥感知生长素的能力。生长素相关基因定量分析说明LecRKIII.2基因能够影响拟南芥中部分生长素相关基因的表达,它们在过表达植株中对生长素的响应程度高于野生型。
(6)通过原核表达,获得LecRKIII.2基因的激酶区域蛋白,为后续研究LecRKIII.2蛋白的功能奠定基础。