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犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus, CPIV),是引起犬呼吸道疾病的主要病原之一,1967年Binn等人首次用犬肾细胞(MDCK)从具有呼吸道症状的病犬中分离到CPIV,目前几乎全世界所有养犬国家都有该病流行。2005年6月,我们从一只临床症状表现为体温升高、咳嗽、打喷嚏、喘气等症状,经治疗无效死亡的一岁博美犬体内分离到一株疑似CPIV,并对该病毒进行生物学特性鉴定和形态学观察。结果表明,该病毒在4℃、25℃条件下能凝集犬、鸡、人“O”型血红细胞,电镜观察可见病毒粒子呈多形性,直径约80nm～200nm,对氯仿敏感,将在MDCK细胞上连续传5代的病毒接种Vero细胞可产生典型的细胞病变,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析呈现六种主要多肽。病毒回归试验表明,将该病毒接种30日龄幼犬,5d后采用RT-PCR技术能从犬呼吸道分泌物中检测到CPIV,并命名为CPIVyz0506。以分离的犬副流感病毒CPIVyz0506为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾脏制备脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA法筛选,有限稀释法亚克隆,最后获得4株能稳定分泌抗CPIV单克隆抗体的细胞株,分别命名为4F3B6、5B4C9、4G7F4、4C9D6,其中4F3B6、5B4C9、4G7F4腹水间接ELISA效价均大于1:106,4C9D6腹水间接ELISA效价大于1:104,经鉴定4F3B6为IgG1亚类,5B4C9、4G7F4、4C9D6均为IgM亚类。Western-blot试验结果表明,4G7F4可与约60kD的蛋白条带发生反应,可能针对该病毒血凝素—神经氨酸酶,4F3B6可与约51kD的蛋白条带发生反应,可能针对该病毒融合蛋白,而5B4C9、4G7F4均不与裂解后的病毒蛋白发生反应。间接免疫荧光检测显示4株单抗均有良好的敏感性。间接ELISA检测结果显示4F3B6、5B4C9、4G7F4与犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)、犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)、新城疫病毒(Newcastle diseasevirus, NDV)无交叉反应,4C9D8与NDV、CDV有较强的交叉反应,中和试验结果显示4F3B6、5B4C9、4G7F4、4C9D8的中和效价(lgPD50)分别为-3、-3.3、-2.7、-2.3。本研究临床病例中分离到CPIV,并对其进行了生物学特性研究,建立了四株能稳定分泌抗CPIV单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为CPIV的深入研究创造了条件。