低能脉冲超声波对骨质疏松性骨折愈合影响的实验研究

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骨质疏松症是骨量减少及骨组织微结构退变,骨生物力学性能下降、脆性增加,易于发生骨折的全身性疾病。随着人口老龄化的加重,越来越多的骨质疏松症患者发生低能量创伤骨折即骨质疏松骨折(OPF)。好发部位常为:桡骨远端、髋部、椎体、肋骨等。尽管骨质疏松骨折愈合的问题尚未完全搞清,但多数研究认为骨质疏松骨折的愈合存在一定障碍,较创伤性骨折更难愈合,因此骨折后治疗困难,患者的生存质量严重受损,同时由于患病群体数量巨大,从而给个人、家庭和社会带来极大危害。如何促进骨质疏松骨折愈合已经成为急需研究解决的热点课题。 低能脉冲超声波(LIPU)是一种机械刺激形式,通过机械振动产生声压波,作用于生物体可产生生物效应。已有少数学者开始有关LIPU对骨折愈合的促进作用的基础研究和临床试验,但研究尚不系统深入,结论也有争议。目前未见LIPU对OPF作用的资料。因即有必要对LIPU对OPF愈合的影响作用进行系统的观察并探讨其机理,为治疗OPF提供一种更安全有效的方法。 本实验制作69只大耳白兔OPF动物模型,随机分为1周、2周、4周、6周和9周五个时间组。利用低能脉冲超起波对右前肢骨折进行重庆医科大学博士研究生学位论文照射、左前肢假处理作为对照。运用组织学、形态学、生物力学、骨密度检测、SPECT血流检测、微血管定量分析、免疫组织化学、原位杂交等技术手段,比较性地研究了LIPU对骨质疏松性骨折愈合的影响。通过比较实验侧与对照侧骨痴骨密度及生物力学性能,探讨LIPU对OPF愈合骨密度及骨强度的作用;对实验侧和对照侧微血管染色定量分析及骨折端血流量测定以探讨LIPU对OPF愈合过程中血管形成、血循环的影响;通过检测骨折端胶原基因表达、胶原构形分析,探讨LIPU对OPF骨折愈合中胶原基质代谢的影响;对细胞增殖活性检测以了解LIPU对骨折端细胞增殖的影响;通过检测BMP一2基因表达情况初步探讨LIPU促进成骨的作用机理。主要实验结果及结论如下: 1、LIPU可促进骨质疏松性骨折愈合。x线摄片显示第2周实验侧出现较多的外骨痴,骨折线较对照侧模糊,对照侧骨折线清晰,仅出现较轻的骨膜反应。第4周时实验侧骨痴增多,骨痴线模糊,对照侧出现骨痴、骨折线开始模糊,第6周时实验侧骨折线消失,对照侧骨痴增多骨折线仍存在但较前模糊。第9周,实验侧髓腔再通,骨折初步塑形,对照侧骨性连接,骨折线消失,髓腔未通。对X片半定量分析显示实验侧骨折愈合速度显著快于对照侧(尸<0.05)。组织学和电镜观察显示,实验侧2周时骨外膜成骨细胞增生活跃,骨折端间为纤维组织,出现新生骨小梁和少量软骨组织成骨细胞和软骨细胞,功能皆活跃;术后4周 重庆医科大学博士研究生学位论文成骨细胞多,折端间以幼稚的编织骨痴为主,间以少量软骨骨痴;术后6周骨折端骨性骨痴连接,骨小梁周围可见到破骨细胞;术后9周骨折端为板层状骨连接,但其间仍有缝状间隙,髓腔再通。对照侧术后2周血肿机化不全,肉芽组织为主,少许成骨细胞出现,功能欠活跃,术后4周,出现新生编织骨小梁,大量软骨组织为主,术后6周时编织骨增多,软骨组织减少,软骨骨痴周围有较多成骨细胞,术后9周,骨折端由编织骨连接。显示LIPU可促进OPF炎症吸收,加快骨痴形成,利于骨痴塑形,从而促进骨折愈合。 2、LIPU改善OPF愈合过程中力学强度,增加骨痴骨量。实验侧术后2周、6周、9周骨痴骨密度分别明显高于同期对照侧(尸值分别<0.0l)。实验侧术后2周、6周、9周骨矿含量(mg%干重组织)显著高于对照侧(尸值分别<0.01,<0.05,<0.05)。术后4周和9周测定骨折处强度,进行三点折断试验,实验侧的峰值负荷、峰值应力、弹性模量和峰值吸收能量均显著优于对照侧(尸值皆<0.05)。 3、LIPU对OPF愈合中微血管及血流量影响观察结果。实验侧血流量增加,在术后IW、ZW、4W时明显高于对照侧血流量(尸<0.05);术后6W和gW时实验侧血流量高于对照侧,但无统计学意义(尸>0.05)。新生微血管染色显示实验侧血管生成增多,并早于对照侧。说明LIPU可增加骨折端血流量,促进骨折端血管再生,加速成骨过程,从而促进骨折愈合。 重庆医科大学博士研究生学位论文 4、LIPU对OPF愈合中胶原代谢影响。I型胶原表达在骨折后IW、Zw、4W时实验侧明显高于对照侧(P<0.05),6W、gW时实验侧低于对照侧但无统计学意义(P>O.05)。n型胶原蛋白表达在骨折后IW、ZW时实验侧明显高于对照侧(P<0.05),4W和6W时实验侧明显低于同期对照侧(尸<0.05);gW时双侧均表现为极低表达。电镜观察胶原构型显示,骨折9周时实验侧胶原原纤维直径为,58.5士5.2nm,对照侧为46.3士9.7nm,实验一侧明显粗于对照侧(尸<0.05)。结果显示:LIPU促进I型和n型胶原表达合成,促进胶原成熟,改善胶原构型,从而促进骨松骨折愈合。 5、LIPU对骨质疏松骨折愈合中细胞增殖活性影响。实验侧术后1周、2周时骨痴内处于增殖状态的骨修复性细胞比例分别为0.453士0.061和0.561士
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