近年来,小G蛋白在甲壳类动物抗病毒免疫反应中的作用日益受到关注,而Rab作为小G蛋白家族的一员,其作用机制逐渐被发现。它主要在真核细胞的胞内和胞外膜转运中发挥作用,并诱导效应蛋白进入特定的膜亚区。最近的一些研究表明,Rab对吞噬体的形成和成熟,并且在细胞吞噬清除病原体中起重要作用。然而,小G蛋白Rab关于对虾自噬的抗病毒机制尚不清楚。为了研究Rab10在对虾体内的功能,分别采用LPS和WSSV注射对虾,结果显示,LPS和WSSV均可显著上调对虾体内Rab10的表达,表明Rab10在抗病原的过程中发挥作用。当si RNA抑制Rab10的表达后,感染病毒的对虾其体内的WSSV拷贝数以及对虾死亡率显著上升。这些结果表明,对虾Rab10具有抵抗WSSV侵染的作用。实验进一步表明在自噬诱导过程中,伴随对虾p62蛋白表达的减少,同时LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量的显著增加,Rab10的表达量也加大,表明Rab10参与自噬。当Rab 10表达被抑制后,对虾自噬增强,同时通过荧光共定位实验表明Rab10通过参与高尔基体到溶酶体的运输进而参与自噬。mi RNA是一类在转录后水平负调控基因表达的内源性非编码小RNA,主要通过结合靶基因m RNA的3’UTR,促使靶基因m RNA发生降解或翻译抑制,从而抑制基因表达。已有研究表明,mi RNA参与了无脊椎动物的抗病毒免疫反应。但是目前,有关对虾mi RNAs调控病毒感染机制的研究主要集中在细胞凋亡、NF-κB等方面,而对虾mi RNAs靶向小G蛋白调控病毒感染尚无报道。本文探究了一种小G蛋白Rab(Rab10)在对虾抗病毒中的作用,并且验证了靶向Rab10的mi RNA,从而来探索一条新的抗病毒途径。本实验通过生物信息学方法预测mi R-2c靶向作用于Rab10,在High Five细胞内验证mi R-2c与Rab10基因的3’UTR互作,并且在对虾活体内也证明mi R-2c与Rab10存在相互作用。在WSSV感染的对虾同时过表达mi R-2c,实验结果表明对虾体内WSSV的拷贝数以及对虾死亡率均显著上升;利用mi R-2c的反义核酸(AMO-mi R-2c)抑制mi R-2c在感染WSSV的对虾体内的表达,引起对虾体内WSSV拷贝数以及因病毒感染导致的对虾死亡率显著下降。这以上结果表明,对虾mi R-2c可通过靶向作用于Rab10,进而促进病毒感染。综上所述,本文的研究阐明了Rab10在虾体内通过参与自噬途径进而调控宿主抵抗病毒感染,扩大了小G蛋白在无脊椎动物免疫研究的视野,丰富了水产无脊椎动物免疫的内容。本文以靶向Rab10的mi R-2c为研究对象,mi R-2c的抑制表达可以提高对虾抵抗WSSV病毒的能力,因此可以为抗病毒WSSV药物的筛选提供新靶点。