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本论文以色氨酸为试验材料,以白水貂为研究对象,采用饲养试验、消化代谢试验、屠宰试验、分子生物学试验等研究方法,探索饲粮色氨酸水平对生长期白水貂生长性能、营养物质消化代谢规律、血清生化指标、免疫因子水平、血清中氨基酸的含量、毛皮品质等的影响,确定白水貂饲料中色氨酸的适宜添加量,结合白水貂空肠转录组试验,初步研究色氨酸的调控机制,为完善白水貂理想氨基酸模型奠定基础。 试验一:饲粮色氨酸水平对育成期白水貂生长性能、营养物质消化率和血清指标的影响 本试验采用单因素随机试验设计,选取120只健康、日龄相近(60d±5d)、体重相近的白水貂,随机分成6个组,每组20只,公母各半,单笼饲养。在基础饲粮蛋白质水平为34%的基础上,负对照组不添加色氨酸(Ⅰ组),试验组添加色氨酸量分别为0.1%(Ⅱ组)、0.3%(Ⅲ组)、0.5%(Ⅳ组)、0.7%(Ⅴ组),正对照组的基础蛋白质水平为36%和不添加色氨酸(Ⅵ组)。本试验预试期7天,试验期60天。其试验结果如下: 饲粮色氨酸水平对育成期白水貂采食量、日增重均无显著差异(P>0.05),公貂Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅵ组平均日增重略高于其他各组,母貂Ⅱ组平均日增重略高于其他组。公貂Ⅲ组氮沉积最高,显著高于Ⅳ组(P<0.05),母貂Ⅱ组氮沉积最高。Ⅱ组、Ⅲ组母貂血清生化指标胆固醇、谷草转氨酶、谷丙转氨酶显著或极显著低于Ⅳ组(P<0.01或P<0.05)。Ⅲ组公貂IgM水平极显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ组、Ⅱ组IgA、IgG水平极显著高于Ⅴ组、Ⅵ组(P<0.01)。Ⅱ组母貂IgG极显著高于Ⅲ组(P<0.01),Ⅱ组、Ⅲ组IgM水平极显著高于Ⅳ组、Ⅵ组(P<0.01)。 小结:(1)对于生长性能和蛋白质、脂肪、干物质消化率等的影响结果表明,育成期公貂饲粮色氨酸添加水平为0.3%(饲粮色氨酸水平0.52%)时比较理想,母貂饲粮色氨酸添加水平为0.1%(饲粮色氨酸水平0.32%)可以获得最好的生长性能。(2)对于氨基酸消化率的影响结果表明,育成期公母貂饲粮色氨酸添加水平为0.1%(饲粮色氨酸水平0.32%)可以获得最好的氨基酸沉积。(3)对于血清生化指标的影响结果表明,育成期公母饲粮色氨酸添加水平达到0.5%(饲粮色氨酸水平0.72%)时,对其肝脏功能造成损伤,导致胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平显著升高,并且影响水貂免疫功能。育成期水貂饲粮中色氨酸适宜水平为0.32%~0.52%。 试验二:饲粮色氨酸水平对冬毛期白水貂生长性能、营养物质消化率、血清指标和毛皮品质的影响 选取体重相近、日龄相近(120d±5d)的试验白水貂120只,试验设计同试验一,预试期5d,正试期70d。试验结果表明: Ⅰ组公貂血清IGF-1含量最高,Ⅰ组母貂血清IGF-1含量极显著高于其他组(P<0.01),各组平均日增重和平均日采食量差异不显著(P>0.05),公貂随着饲粮色氨酸添加量的增多,平均日采食量有下降的趋势;母貂Ⅱ组氮沉积最高。公貂高蛋白组各氨基酸消化率最高,除半胱氨酸、色氨酸外,Ⅵ组氨基酸消化率极显著高于其他各组(P<0.01),Ⅰ组半胱氨酸和色氨酸消化率与Ⅵ组无显著差异(P>0.05),母貂高蛋白组各氨基酸消化率也是最高。Ⅱ组公貂谷丙转氨酶最低,胆固醇水平Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组极显著低于Ⅵ组(P<0.01),母貂Ⅰ组、Ⅵ组甘油三酯水平显著低于Ⅱ组(P<0.05),血清谷草转氨酶含量Ⅳ组显著高于Ⅵ组(P<0.05)。公貂Ⅳ组免疫指标和免疫器官指数均达到最高,母貂IgA水平Ⅰ组显著高于Ⅱ组、Ⅳ组、Ⅴ组(P<0.05),IgG、IgM及免疫器官指数Ⅲ组、Ⅳ组最高。比较各组冬毛期毛皮品质,Ⅱ组综合品质最好。 小结:饲粮色氨酸水平达到0.26%时,可以满足冬毛期白水貂色氨酸营养的基本需要,获得较理想的生长性能、营养物质消化率,冬毛期饲粮色氨酸水平在0.26%~0.36%比较适宜。饲粮色氨酸水平达到0.76%时,氨基酸代谢失去平衡,肝脏受到损伤。 试验三:饲喂不同色氨酸水平饲粮冬毛期公貂空肠组织的转录组学研究 给白水貂饲喂不同水平色氨酸饲粮,在冬毛期结束后,Ⅰ组~Ⅴ组每组选取5只公貂进行屠宰试验获得空肠组织,对空肠组织进行RNA提取、测序及序列组装,获得Unigene组装总数97332条,总长度124017345nt,首次建立白水貂空肠组织转录组数据库。 通过与NR、Swiss-Prot、GO、COG、KOG、eggNOG4.5、KEGG数据库比对获得Unigene注释,饲粮添加色氨酸试验组(Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组)注释的Unigene分别与无添加色氨酸组(Ⅰ组)进行比较。Ⅰ组与Ⅱ组比较,共获得65个差异基因,Ⅰ组与Ⅲ组比较,共获得122个差异基因,Ⅰ组与Ⅳ组比较,共获得132个差异基因,Ⅰ组与Ⅴ组比较,共获得55个差异基因。由此发现,Ⅳ组与对照组比较差异基因最多,与试验二相结合,Ⅳ组色氨酸含量过高对空肠组织基因组产生影响。 在GO分类下差异基因比对,三大功能分类中免疫系统过程、繁殖过程、生长功能、信号功能、生物附着、胞外区域及受体活动功能等存在较大差异,从以上功能分类中筛选,总共找到9条相关基因,分别为HSPA8(Heat shock71kDa Protein)、Heat shock70kDa Protein1、rpl22、rpl13a、48s ribosomal protein SA、人基质/内质网钙ATP酶(ATP2A)、RBP4(Retinol-binding protein4)、ACTB、FGA1。与试验二结果相结合,FGA1基因影响补体系统,从而影响免疫调节功能。