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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,目前乳腺癌的发病率逐年上升,极大地威胁了女性的身体健康。因此,癌症的早期诊断和治疗显得尤为关键。一方面,超声成像是早期成像的主要分子成像技术,而超声微泡造影剂,如PLGA纳米泡,不仅可以提高图像对比度,还具有较好的生物安全性;另一方面,化疗仍然是治疗癌症的主要方式,常用的化疗药物如DOX能一定程度地抑制肿瘤的生长。但是,乳腺癌对化疗药物的多药耐药性极大地限制了药物的使用,通过RNAi手段可以通过阻止化疗药物的泄露来克服多药耐药性,实现对肿瘤的基因治疗。肿瘤细胞的微环境与正常细胞存在差异,如:肿瘤组织的pH值维持在5.0-5.5之间,而正常组织的pH一般保持在7.35-7.45之间。PAH-Cit是一类电荷翻转共聚物,在酸性环境下酰胺键极易水解。基于以上理由,本文构建了一种具有pH响应的PLGA纳米泡,共载DOX和P-gp shRNA实现超声成像和药物、基因协同治疗。首先,我们合成了Dox-PLGA,通过SEM、DLS、UV等方式证实成功地合成了粒径约300nm左右的Dox-PLGA纳米泡。然后,通过1HNMR和FTIR验证了PAH-Cit聚合物的成功合成。进一步在纳米泡表面通过层层自组装技术修饰各类聚合物,制得最终的纳米泡Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI NBs,并通过电荷翻转证实了复合纳米泡的成功合成。利用琼脂糖凝胶电泳实验探究P-gp shRNA在不同pH条件下的释放情况验证了复合纳米泡的pH响应性。通过共聚焦显微镜观察MCF-7和MCF-7/ADR细胞对Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI NBs的内吞情况,发现内吞具有时间依赖性,流式定量结果与其一致。通过定量PCR检测耐药细胞中P-gp mRNA的表达情况,结果显示携带P-gp shRNA组较对照组能够明显抑制细胞膜上P-糖蛋白的表达。CCK-8实验不仅能够证明纳米载体对多种癌细胞都具有良好的生物安全性,而且证明了同时携带Dox和P-gp shRNA的纳米泡具有较好的协同治疗效果,Calcein-AM/PI双染实验可证明这一结论。Western blot检测结果显示Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI NBs主要通过线粒体途径,使Bax蛋白水平下调,Bcl-2蛋白水平上调,并且通过活化Caspase-3来促进细胞发生凋亡。体内外成像实验均表明,Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI/P-gp shRNA NBs拥有较强的超声信号。HE染色结果和血液学分析证实Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI/P-gp shRNA NBs具有很好的生物安全性,并且通过测定裸鼠肿瘤的变化情况以及HE和Tunel染色结果发现复合纳米泡具有良好的协同抗肿瘤作用。研究结果表明Dox-PLGA/PEI/PAH-Cit/PEI NBs具有很好的体外、体内化疗/基因协同治疗和超声成像的效果,可以促进肿瘤细胞凋亡,为未来探究关于pH响应性的药物载体实现肿瘤部位可控释放的研究提供参考。