DDT降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

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本文以有机氯杀虫剂DDT作为研究对象,通过对广州某船场DDT污染场地的土样进行微生物富集培养和分离筛选,得到8株能降解DDT的菌株,对其进行了形态学、生理生化特性及脂肪酸鉴定和16S rDNA分子生物学鉴定,并对8株菌的生长和降解特性的进行了初步研究,主要研究内容如下:通过微生物富集培养和平板划线分离法,从DDT污染土壤中分离出8株能以DDT为唯一碳源进行生长的DDT降解菌。通过形态结构、生理生化特性、脂肪酸分析及16S rDNA分子生物学方法,分别对这8株菌进行了鉴定。结果菌株5~#、6~#属于代尔夫特菌属(Delftia sp.),菌株20~#属于Thauera sp.,菌株12-1~#属于产碱杆菌属(Alcaligenes sp.),菌株23~#、24~#、12-2~#、12-3~#属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。利用高效液相色谱仪建立DDT分析条件,确定分析温度为25℃,流动相是99.9%的甲醇,流速为1ml/min,探测在254nm处的峰值。根据外标法测定8株菌对DDT的最终降解率,在30℃,pH7.0,DDT浓度为20mg/L的培养条件下,8株菌均对DDT有一定的降解效果,且最终降解率均达到10%以上,其中菌株12-3~#对DDT的最终降解率最高,培养8d后达到51.6%。利用比浊法对8株菌的生长状况进行研究,绘制其生长曲线,结果表明8株菌都能利用DDT生长。菌株5~#、6~#、23~#、12-1~#生长速率较快,在12h时达到最大吸光值,即菌体密度达到最大值,随后进入稳定生长期;菌株20~#和24~#生长速率较慢,分别在22h和28h达到最大菌体密度;菌株12-2~#和12-3~#生长速率较最慢,在培养30h时达到最大菌体密度。利用高效液相色谱法对8株菌的降解状况进行研究,绘制其降解曲线,结果表明在30℃,DDT浓度为20mg/L,150r/min摇床振荡培养8d的条件下,8株菌均能在不同程度上降解DDT,其中12-3~#菌对DDT的最终降解率最高。采用考马斯亮蓝G-250法测定8株菌菌体蛋白质含量,其中5~#菌株蛋白质含量最高,每毫升菌液里的蛋白质含量为73.118μg,20~#菌株蛋白质含量最低,每毫升菌液里的蛋白质含量为64.345μg。
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