论文部分内容阅读
目的:比较脾虚证患者和健康人酸刺激前后唾液分泌和唾液淀粉酶活性的差异,探讨两者酸刺激前后s AA活性差异的机制,为“脾主涎”理论和脾虚证的临床诊断提供依据。方法:1.临床实验:征集脾虚证患者与健康人各30例,定时采集他们柠檬酸刺激前后的全唾液样本,测定唾液流率、p H值和总蛋白含量,测定s AA活性、s AA含量和AMY1拷贝数。(1)比较脾虚患者和健康人刺激前的和刺激后的唾液样本各测定值,再分别比较两组刺激前后各测定值的差异性。(2)分析两组s AA活性与s AA含量、AMY1拷贝数之间的相关性。2.动物实验:(1)选取SD大鼠雌性30只,建立大鼠酸刺激前后唾液采集方法;(2)另选取48只SD雌性大鼠,SPF级条件饲养。随机分为脾虚模型组(n=24)和正常对照组(n=24),脾虚模型采用利血平法复制。采集两组大鼠酸刺激前后全唾液样本并测定其s AA活性。(3)随机将脾虚大鼠分为脾虚对照组、脾虚+激动剂组、脾虚+阻断剂组,随机将正常大鼠分为正常对照组、正常+激动剂组、正常+阻断剂组。采集大鼠酸刺激前后全唾液并测定其s AA活性。取完唾液样本即刻解剖摘取腮腺组织,测定腮腺组织s AA活性、s AA含量、c AMP含量、β-AR受体表达量。①组内比较两组大鼠酸刺激前后的唾液样本差异性,组间比较脾虚大鼠和正常大鼠刺激前的和刺激后的唾液样本。②组间比较脾虚对照组和正常对照组腮腺组织的各测定指标的差异性。③观察激动剂和阻断剂对两组大鼠的干预作用。结果:1.临床实验:(1)①脾虚患者刺激前的唾液样本除了在p H值上比健康人的显著高,其它没有显著差异;脾虚患者酸刺激后的唾液样本的流率、总蛋白含量、s AA活性、s AA比活和s AA含量显著低于健康人的,但p H值无差异;脾虚患者和健康人的AMY1拷贝数没有显著差异;②脾虚患者酸刺激前后各指标差异不显著,除总蛋白含量比值小于1,其余各指标酸刺激前后比值均略大于1;而健康人的刺激前后各指标差异显著,各指标酸刺激后比酸刺激前比值均大于1。两组s AA活性比值差异显著。(2)两组唾液样本的s AA活性和s AA含量之间存在显著的正相关(健康人刺激前r=0.61,刺激后r=0.67;脾虚患者刺激前r=0.69,刺激后r=0.72),刺激前的s AA活性与AMY1拷贝数显著相关(健康人r=0.52,脾虚患者r=0.51),刺激后无相关性。两组的s AA活性比值与s AA含量比值之间存在显著相关性(健康人r=0.85;脾虚患者r=0.36),然而,健康人s AA活性比值与AMY1拷贝数无显著相关性,而脾虚患者则有显著相关性(r=0.45,P<0.05)。2.动物实验:(1)大鼠唾液样本采集方法探索,结果得出以0.4 mol/L 0.50×0.50 cm柠檬酸滤纸,每隔2.5 min刺激大鼠舌尖30 s,采集酸刺激后全唾液的方法,能显著增加大鼠s AA活性和流率(P<0.05),刺激前s AA活性与流率有显著正相关性(P<0.05),刺激后s AA活性与流率有显著负相关性(P<0.05)。(2)脾虚大鼠建模11天的体重变化比较健康大鼠显著下降,建模第11天出现典型脾虚症状,脾虚大鼠表现为双目懒睁、扎堆、弓背、毛色不泽、大便溏软。(3)①脾虚大鼠刺激前后无显著差别,正常大鼠则显著增加;两组刺激前的样本无显著差异性,刺激后的差异显著。②比较两组腮腺的各项指标,脾虚大鼠腮腺中的s AA活性和s AA含量显著高于正常大鼠,β1-AR表达显著降低,β2-AR表达显著高,c AMP含量显著降低。③激动剂能显著增加两组大鼠唾液的s AA活性,显著降低两组大鼠腮腺的s AA活性和s AA含量,对c AMP、β-AR受体影响不明显;阻断剂影响结果不明显。结论:脾虚患者对酸刺激的敏感性降低是脾虚患者酸刺激前后s AA活性比值下降的原因。脾虚患者酸刺激后s AA活性低下与s AA含量有关,且具有AMY1拷贝数变异的遗传学基础。脾虚大鼠受体表达障碍,引起分泌调控通路的障碍,据此得出脾虚患者存在急性分泌功能低下。