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细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)是女性生殖道感染的最常见疾病,可引起严重的并发症,包括盆腔炎、绒毛膜羊膜炎、早产、低出生体重儿,也使患者增加了感染HIV病毒的风险。复杂的阴道菌群变化在细菌性阴道病的发病中起着重要的作用。本工作应用构建16s rRNA基因克隆文库的非培养方法对健康妇女及BV患者的阴道菌群进行分析。主要方法与结果如下:1、根据Amsel临床标准及Nugent评分标准确诊健康妇女及BV患者各3例。提取其阴道分泌物中细菌的总DNA,构建16s rRNA基因克隆文库。运用ARDRA分析275个阳性克隆子,选择不同带型的代表克隆子20个进行测序,得到了20条有序列差异的16s rRNA基因,将这20条序列通过GenBank数据库中的BLAST程序进行序列相似性比较分析,产生了20个种。研究发现健康妇女样本的基因文库中分别以L.crispatus和L.iners克隆子占较大比例,另外存在少量的L.vaginalis和L.jensenii克隆子。BV患者样本的基因文库中菌种明显增多,但均以Gardnerella vaginalis和Atopobium vaginae的克隆子占较大比例。2、应用Atopobium vaginae 16s rRNA基因的特异引物(AV1F,AV3R)对健康妇女(12例)及BV患者(14例)共26例样本的总DNA进行PCR扩增。14例BV患者的样本中有11例(78.6%)产生了特异性扩增条带,而在12例健康妇女的样本中仅有1例(8.3%)出现。结论:1.本研究表明健康妇女阴道的菌种单一,以乳酸杆菌占优势,L.iners为优势菌种之一。2.本研究发现BV患者阴道菌种复杂多样,但均以Gardnerella vaginalis及Atopobium vaginae共同占优势。PCR分析证实Atopobium vaginae与BV的发生具有相关性。3.基于16s rRNA基因序列的非培养方法对阴道菌群的分析具有重要的价值,值得进一步应用此方法对大样本的人群进行研究。