肝细胞性肝癌(HCC)是消化道肿瘤中最常见的一种恶性肿瘤,其特点主要为恶性程度高,发展迅速、易转移。在人们对肝癌发病原因的研究过程中,我们发现肝炎病毒的感染、酒精性/脂肪性肝硬化引起的肝病变、黄曲霉素的摄取等因素都与肝癌的发生密切相关。手术治疗仍然是肝癌治疗的首选方案,肝癌病人预后差与肿瘤复发转移和肝癌细胞对化疗药物不敏感密切相关,因此通过科学实验去研究肝癌发生发展的诱因,挖掘其发生发展的机制在肿瘤学的研究中显得尤为重要,其对于肿瘤的诊断、治疗和预防具有一定的临床应用价值和重要的指导意义。ASPP2是ASPP家族(apoptosis stimulating proteins of p53)中被研究得最多也最为透彻的成员之一。ASPP2作为p53凋亡刺激蛋白其最重要的功能就是能够调控p53及其家族成员的凋亡功能。研究证实在肿瘤的发生发展中,ASPP2蛋白发挥着非常的调控作用。我们课题组在前期的研究中发现:肝癌细胞能够通过DNA甲基化使ASPP2蛋白表达下调从而无法发挥其抑癌基因的作用,有利与肝癌细胞的生长和转移。最新文献也有报道ASPP2能够与自噬相关蛋白Beclin1相互结合。本项研究中,我们将探讨ASPP2对肝癌细胞自噬的调控作用,及其在肝癌细胞存活、生长和化疗敏感性中的意义。自噬是一种广泛存在于真核细胞中的由细胞中初级溶酶体处理内源性底物的重要生命现象。自噬的功能就是对外部刺激产生的一种适应性的反应。自噬的防御功能表现在能够清除胞质内受损的细胞器及新陈代谢的产物。尽管目前对自噬的研究中认为其在功能上具有双重性,但在肿瘤细胞中,自噬的功能以促进细胞存活为主。肿瘤细胞常常面临着营养缺乏的生存环境,那么肿瘤细胞是如何适应体内的这种环境又是如何进一步发展是当前肿瘤研究的关键。有实验发现,自噬活性在目前研究的多种人类肿瘤中存在着明显的差异,细胞中自噬水平的调控对肿瘤的发生发展起了重要的作用。本文的实验章节主要有6大部分构成,从现象-机制-功能-临床资料等多方面探讨aspp2对肝癌细胞自噬的调控及其在临床应用中的价值。首先通过自噬小体荧光检测、形态学观察、自噬相关基因表达水平检测,发现aspp2可以抑制营养缺乏状态下肝癌细胞发生的自噬。接下来在机制的探讨中,我们证实aspp2不但能够通过激活ampk-mtor信号通路抑制肝癌细胞的自噬,而且aspp2还能够与自噬重要相关基因beclin1物理性结合从而阻断beclin1介导的自噬。基因芯片分析、脂肪能量代谢的相关检测及软琼脂克隆形成等实验共同证实:aspp2、自噬、能量代谢及肿瘤细胞生长之间存在着一定的关系,肝癌细胞中的自噬可以为肿瘤细胞的生长提供更多的营养、能量。aspp2能够抑制肝癌细胞的自噬水平,从而阻断了肿瘤细胞的营养供应,实现对肿瘤细胞生存生长的抑制作用。同时我们还在细胞增殖及裸鼠成瘤实验中发现:aspp2对肝癌细胞中自噬的抑制作用可以提高肝癌对于常规化疗药物的敏感性。这为研制出临床上能够提高对化疗药物敏感的药物佐剂等提供了重要的依据。最后,临床近百例肝癌组织标本的检测和统计结果进一步证实了我们的实验结果,即aspp2、beclin1及肿瘤生长指标之间存在一定的关系,ASPP2可以通过负调控Beclin1介导的自噬从而抑制肿瘤的进展。综上所述,通过本文的实验研究,我们证明了P53促凋亡蛋白ASPP2在肝癌细胞自噬中发挥的重要作用,证实了ASPP2可通过对细胞中自噬过程的抑制增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性并抑制了肿瘤的生长。我们的研究成果不仅深化了对自噬在肿瘤发生发展中的作用和机制的认识,同时也为肿瘤药物研发提供了新靶点和新思路。