目的：为了提高产品的质量,制造出更经济、更安全、更有效乙型脑炎灭活疫苗,我们从生产和检定两个方面着手：一是简化生产程序,优化制备疫苗过程中的各个环节,选择最简单、最便宜又高效的方式方法进行生产,使乙脑疫苗更加安全、有效,且价格更便宜；二是完善检定技术,寻找最合适检测方法,减少干扰因素,使检测方法简单,条件易于控制。制定严格的操作规程,使检定结果最接近真实值,更能体现疫苗的真实情况,制造出更安全的人用乙型脑炎疫苗。方法：1.复苏Vero细胞,并在细胞瓶中传代、扩增,建立主细胞库和工作细胞库。2.将乙脑病毒鼠脑P3株感染Vero细胞,制备乙型脑炎病毒Vero细胞P3株(P3MV株),建立主种子批和工作种子批。3.用乙型脑炎病毒P3MV株接种Vero细胞,在适宜温度下培养,当细胞病变达到+++-++++时,收获病毒液。4.将收获的病毒液合并、灭活、浓缩、纯化,经稀释制备成乙脑疫苗成品,再分装、冻干5.按照《中国药典三部》2005版的要求,对制备疫苗的各个环节及半成品、成品进行检定。结果：1.扩增细胞,经过传代扩增,将Vero细胞131代定为主细胞库,135代为工作细胞库；2.制备毒种库,乙型脑炎病毒Vero细胞P3株,经检测毒力稳定,免疫原性好,对现在流行的病毒株都具有良好的保护作用,建立病毒库,将5代设为主种子批,8代设为工作种子批；3.收获病毒液,在接种病毒后每日观察细胞病变,当细胞病变达到+++-++++时收获病毒液,每日收获1次,连续收获3-5天,合并后加入甲醛灭活。4.将灭活实验合格的病毒收获液超滤浓缩50倍。5.采用凝胶层析的方法纯化疫苗,去除杂蛋白,降低不良反应的发生。6.将纯化后原液稀释分装,制备成冻干或者水针。7.按照药典的要求对成品进行全面检定。结论：1.使用Vero细胞作为乙脑疫苗的生产基质,细胞学稳定,没有外源因子污染和致瘤性的危险,且培养简单、使用代次高。2.选用灭活工艺生产疫苗。采用经典的甲醛作为灭活剂灭活乙脑病毒,按照1:2000的浓度加入甲醛,在4℃作用28天,通过细胞培养-动物法进行灭活验证。3.采用Sepharose6FF凝胶过滤层析纯化疫苗,其分离条件温和、重现性好,还具有较高的回收率。4.采用细胞蚀斑法代替小鼠法进行病毒滴度检测,试验周期短、操作简单、成本低。