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研究背景甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤。甲状腺局部乳头状增生以及C细胞增生等局部增生性病变具有转化为良、恶性肿瘤的潜能,在甲状腺细胞异常增殖中十分常见。近年来,甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma, PTC)发病率在世界范围内呈上升趋势,部分碘过量地区PTC发病率增高。育龄期人群PTC患病率的女性与男性之比为3-5：1。乳腺癌患者伴发甲状腺癌的概率明显增高。乳腺癌的发生与雌激素和雌激素受体α(Estrogen receptor a, ERa)密切相关。细胞学实验发现,甲状腺肿瘤细胞的增殖与ERa也具有密切联系。环境内分泌干扰物双酚A(Bisphenol A, BPA)是一种雌激素类似物,可作用于ERa,导致乳腺、卵巢等器官组织的增生性病变甚至癌变。但BPA如何影响甲状腺增生性病变的发生以及与甲状腺ERa表达的关系尚不明确。我们前期体外研究发现10-8～10-6mmol/L BPA可显著促进人PTC细胞增殖；前期动物实验表明,在碘过量基础上,BPA250组F344大鼠甲状腺肿瘤发病率最高,BPA1000组甲状腺肿瘤恶性度最高。目的在碘过量基础上,研究BPA对F344大鼠甲状腺局部增生性病变发生的影响以及对甲状腺组织ERa表达的影响,探讨BPA促进甲状腺组织增生的部分作用机制,为甲状腺肿瘤的预防以及BPA相关产品的合理使用提供一定的科学依据。方法4周龄雌性F344大鼠,按2800mg/kg体质量一次性皮下注射致癌药物N-亚硝基二异丙醇胺(N-Bis (2-hydroxypropyl) nitrosamine, DHPN).将大鼠随机分为对照组、碘化钾(Potassium iodide, KI) 1000ng/L组(KI组)、BPA250μg/kg+ KI1000μg/L组(BPA250+KI组)和BPA1000μg/kg+KI1000μg/L组(BPA1000+KI组),共4组,每组10只。64周后,测定KI组和对照组24h尿碘浓度,统计各组甲状腺局部增生性病变的病理类型和发生率,检测ERα的免疫学表达和蛋白表达量,分析ERa和增殖指标PCNA的表达相关性及表达定位,测定血清雌二醇(Estradiol, E2)浓度。计量资料以(?)±s表示,组间比较方差齐时采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验或t检验,方差不齐时采用非参数检验。计数资料分析采用Fisher确切概率法。大鼠甲状腺ERa与PCNA免疫学表达相关性及血清E2浓度与甲状腺ERα免疫学表达相关性采用Spearman相关性分析。P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.大鼠24h尿碘浓度KI组大鼠24h尿碘中位数(Median of urinary iodine, MUI) (320.36μg/L)达到碘过量标准,与对照组(88.21μg/L)相比差异具有统计学意义(P<0.01)。KI组24h尿碘平均值(311.84±19.22μg／L)与对照组(90.50±18.83μg／L)相比具有显著性差异(P<0.001)。2.大鼠甲状腺局部增生性病变病理类型各组均出现不同程度局部增生性病变,包括C细胞增生和局部乳头状增生,其中局部乳头状增生又分为3级。本实验中,对照组出现2例局部增生性病变,均为I级乳头；KI组出现7例,包括1例C细胞增生,3例I级乳头,2例II级乳头和1例Ⅲ级乳头；BPA250+KI组出现3例局部增生性病变,分别为2例II级乳头和1例Ⅲ级乳头；BPA1000+KI组出现8例局部增生性病变,分别为1例C细胞增生合并I级乳头,3例I级乳头,2例II级乳头和2例Ⅲ级乳头。3.大鼠甲状腺增生性病变发生率3.1局部增生性病变发生率组间相比有显著性差异(P<0.05). BPA1000+KI组局部增生性病变发生率最高(80.00%),对照组最低(22.22%),两两相比无显著差异。3.2增生性病变(含肿瘤及局部增生性病变)总体发生率组间相比差异有统计学意义(P<0.05)。两两比较,BPA1000+KI组(100%)较对照组(33.33%)显著增高(P<0.01)。4.大鼠甲状腺ERa免疫组化结果4.1大鼠甲状腺ERa免疫组化阳性率组间相比差异无统计学意义(P>0.05)。阳性率最高者为BPA1000+KI组和BPA250+KI组(均为88.89%),对照组阳性率最低(42.86%)。4.2大鼠甲状腺ERa免疫组化评分组间相比具有统计学差异(P<0.05)。两两比较发现,BPA1000+KI组评分最高,其次是BPA250+KI组,均较对照组明显增高(P<0.01；P<0.05)。此外,BPA1000+KI组ERa评分较KI组显著增高(P<0.05)。5.大鼠甲状腺ERa蛋白Western blot结果组间相比有统计学差异(P<0.01)。BPA1000+KI组ERa表达水平最高,其次为BPA250+KI组,该两组与对照组相比均有显著性增高(P<0.01；P<0.01)。KI组ERa表达水平与对照组无明显差别(P>0.05)。BPA1000+KI组及BPA250+KI组与KI组相比均显著升高(P<0.01；P<0.05)。6.大鼠甲状腺ERa及PCNA免疫学表达的相关性Spearman相关性分析显示,两者在甲状腺的免疫学表达呈正相关关系且具有统计学意义(n=27,r=0.504,P=0.004)(忽略分组影响)。7.大鼠甲状腺ERa及PCNA的免疫学表达定位7.1 ERa及PCNA在甲状腺增生性病变中的表达定位ERa在甲状腺肿瘤和局部增生性病变中均可阳性表达。当病变部位ERa阳性时,周围正常甲状腺组织ERa表达量呈弱阳性或阴性表达。在高度恶性的MTC和ATC中,ERa呈弥漫性阳性表达。PCNA表达部位与ERa基本一致。7.2 ERa及PCNA在正常甲状腺组织中的表达定位在正常甲状腺滤泡组织中,ERa与PCNA均主要分布于立方样或高柱状滤泡细胞,同时伴有滤泡腔直径较小及腔内胶质含量稀薄。在周边相对扁平、较大直径滤泡腔和含有丰富胶质的甲状腺细胞,ERa及PCNA分布减少。8.大鼠血清E2浓度与甲状腺ERa表达的相关性四组血清E2浓度组间相比无显著性差异(P>0.05)。Spearman相关性分析显示,大鼠血清E2浓度与相应甲状腺ERa免疫组化评分之间无显著相关性(n=22,r=0.013,P=0.956)(忽略分组)。结论1.在DHPN基础上,碘过量未能显著升高F344大鼠甲状腺增生性病变的发生率。2.在DHPN及碘过量基础上,BPA1000可显著升高F344大鼠甲状腺增生性病变发生率。3.一定浓度的BPA可上调F344大鼠甲状腺组织ERα的表达。4.甲状腺组织ERa表达上调可能与甲状腺增生性病变的发生具有相关性。