目的:本论文以寻找慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关关键分子、探讨中医药干预机制为主要研究目标。以mRNA为目标分子,通过筛选慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关的关键mRNA,验证其在“炎-癌”转化中的关键作用,初步揭示慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化的关键分子机制。基于关键分子,在评价健脾清热活血法治疗慢性萎缩性胃炎有效性的基础上,探讨中医药调控关键分子,阻断慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化的可能机制。方法:1.慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关关键mRNA的筛选与验证本部分研究以mRNA为目标分子,采集胃“炎-癌”不同病理阶段的临床患者胃黏膜标本（慢性非萎缩性胃炎（n=5）、慢性萎缩性胃炎（n=5）、胃癌前病变（n=5）、胃腺癌（n=5））共20例样品进行高通量二代测序筛选慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关差异表达的mRNA。以FunrichV3.0进行分子功能富集分析及蛋白互作分析。在此基础上扩大样本量,引入TGCA及GEO数据库的大样本基因芯片数据,以TGCA和GEO数据库中正常人、慢性萎缩性胃炎、胃腺癌,172例临床患者胃黏膜样本的基因芯片数据为研究对象,以GEO2R、CRN及GEPIA工具分析芯片表达谱数据,筛选慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关显著差异表达的mRNA。以FunrichV3.0进行分子功能富集分析,String数据库进行蛋白互作分析。整合分析基因芯片数据及高通量二代测序数据,共同筛选慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关的关键mRNA。候选的关键mRNA分子,首先在胃“炎-癌”四个病理阶段（慢性非萎缩性胃炎（n=7）、慢性萎缩性胃炎（n=7）、胃癌前病变（n=7）、胃腺癌（n=7））共28例人胃黏膜样品中进行荧光实时定量PCR检测。经过小样本验证所明确的mRNA分子,进一步扩大样本量分别在基因水平及蛋白水平验证。176例人胃黏膜样品进行实时荧光定量PCR检测（慢性非萎缩性胃炎（n=60）、慢性萎缩性胃炎（n=59）、胃癌前病变（n=30）、胃腺癌（n=27））。121例人胃黏膜样品进行免疫组化检测（慢性非萎缩性胃炎（n=33）、慢性萎缩性胃炎（n=34）、胃癌前病变（n=25）、胃腺癌（n=29））。明确关键mRNA在慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化中的重要作用。所明确的关键mRNA,依据其在胃“炎-癌”个病理阶段的表达水平,以慢性非萎缩性胃炎为对照组,绘制单个mRNA及组合mRNAs用于预测胃癌前疾病及胃癌的ROC曲线,分析其用于预测胃癌前疾病及胃癌的特异性与灵敏度。同时分析其与OLGA、OLGIM分期的相关性,阐明关键mRNA在慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化中的重要临床意义。2.健脾清热活血法调控“炎-癌”相关关键mRNA治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制本部分研究首先通过多中心随机对照试验评价健脾清热活血法治疗慢性萎缩性胃炎的有效性。受试者来源于11家广东省内的三甲中医院,经纳入及排除标准筛选受试者,试验药为健脾清热活血方（胃萎清颗粒）,对照药为叶酸片,疗程为24周,以病理组织学为主要结局指标。研究周期为2015年6月至2018年12月。在完成健脾清热活血法治疗慢性萎缩性胃炎有效性的基础上,筛选治疗有效且治疗前后均冻存胃黏膜标本的受试者进入疗效机制研究。以所验证的慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关的关键mRNA为靶点,通过实时荧光定量PCR技术检测两组治疗前后关键mRNA表达水平,评估治疗前后表达水平的差异变化。借此探讨健脾清热活血法及叶酸片调控关键mRNA的表达,治疗慢性萎缩性胃炎,阻断“炎-癌”转化的可能机制。结果:1.慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关关键mRNA的筛选与验证20例胃“炎-癌”不同病理阶段的人胃黏膜标本高通量二代测序技术共筛选出慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关的mRNA,1781个。“炎-癌”相关通路802个,分子功能128个、细胞组分241个、生物学过程68个。其中,P<0.05的通路90个,分子功能30个、细胞组分38个、生物学过程16个。蛋白相互作用关系885条。TGCA及GEO的基因芯片数据挖掘筛选出慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关mRNA,13个。“炎-癌”相关通路114个,分子功能8个、细胞组分18个、生物过程7个。P<0.05的通路25条,分子功能6个、细胞组分5个、生物学过程0个。邻近相互作用蛋白23个,相互作用关系27条。整合分析基因芯片数据及高通量二代测序数据,候选慢性萎缩性胃炎“炎-癌”相关关键mRNA5个。候选的5个mRNA分子均在28例胃“炎-癌”不同病理阶段的人胃黏膜标本进行实时荧光定量PCR检测,结果显示5个mRNA的表达水平在四个病理阶段均存在统计学差异（P<0.05）。在小样本验证结果上,筛选“炎-癌”四个阶段表达趋势一致的LYZmRNA及SSTmRNA扩大样本量验证。LYZmRNA及SSTmRNA在176例胃“炎-癌”不同病理阶段的人胃黏膜标本进行实时荧光定量PCR检测,结果显示,LYZmRNA在慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃癌前病变、胃腺癌四个病理阶段表达水平呈非正态分布（P>0.05）,2-ΔΔCt中位数分别为1.18>0.79>0.52>0.35,组间存在统计学差异（P<0.05）,整体表达水平呈差异性下降趋势。SSTmRNA在慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃癌前病变、胃腺癌四个病理阶段表达水平呈非正态分布（P>0.05）,2-ΔΔCt中位数分别为0.941>0.53>0.32>0.12,组间存在统计学差异（P<0.05）,整体表达水平呈差异性下降趋势。该结果在蛋白水平得以验证,免疫组化结果显示LYZ在四组阳性表达强度呈逐渐下降趋势（χ2=7.47,p=0.00）。SST在四组中存在差异表达,阳性率呈逐渐下降趋势。（χ2=19.64,p=0.00）。因此,明确LYZmRNA及SSTmRNA在慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化中的重要作用。LYZmRNA的ROC曲线显示,以慢性非萎缩性胃炎组为对照,慢性萎缩性胃炎组 AUC=0.636,P=0.01;胃癌前病变组 AUC=0.711,P=0.00;胃腺癌组 AUC=0.867,P=0.00。SSTmRNA的ROC曲线显示,以慢性非萎缩性胃炎组为对照,慢性萎缩性胃炎组 AUC=0.618,P=0.02;胃癌前病变组 AUC=0.728,P=0.00;胃腺癌组 AUC=0.831,P=0.00。（LYZmRNA+SSTmRNA）的组合ROC曲线显示,以慢性非萎缩性胃炎为对照,AUC=0.718,P=0.00;胃癌前病变组 AUC=0.762,P=0.00;胃腺癌组 AUC=0.894,P=0.00。AUC>0.5,P<0.05说明SSTmRNA及LYZmRNA用于预测胃癌前疾病及胃腺癌具有良好的特异性和灵敏度,联合应用诊断效果更佳。LYZmRNA的表达水平与OLGA、OLGIM的分期有关,0期分别与Ⅰ期、Ⅱ期的表达水平具有差异（P<0.05）。SSTmRNA的表达水平与OLGA、OLGIM的分期有关,0期分别与Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的表达水平具有差异（P<0.05）。2.健脾清热活血法调控“炎-癌”相关关键mRNA治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制在评价健脾清热法治疗慢性萎缩性胃炎有效性的临床研究中,共有8家中心参与,3家中心退出,共纳入177例受试者,其中,完成研究的受试者共131例,纳入主要结局评价。其中,健脾清热活血方组65例,叶酸片组66例,受试者性别、年龄分布均无组间及组内差异（P>0.05）。以受试者自身前后对照,评估治疗前后的病理积分变化,结果得出Z=-3.55,P=0.00差别具有统计学意义。为进一步明确二者治疗效果的差别,治疗前两组受试者的CAG的病理程度在同一水平,具有可比性（P>0.05）。治疗后两组受试者的CAG病理积分无明显差异（Z=-0.201,P=0.84）。健脾清热活血方组（治疗前-治疗后）OLGA及OLGIM分期的变化,P=0.00,存在统计学差异。叶酸片组（治疗前-治疗后）OLGA及OLGIM分期的变化P=0.00,存在统计学差异。治疗后（健脾清热活血方-叶酸片）两组OLGA与OLGIM的差异无统计学意义（Z=-0.13,P=0.89;Z=-1.33,P=0.18）。健脾清热活血方治疗CAG的病理疗效为80.00%,叶酸片为83.33%,二者差别无统计学意义（Z=-0.21,P=0.83）。在完成疗效机制研究中,健脾清热活血方组n=21,叶酸片组n=21,治疗前后胃黏膜中LYZmRNA及SSTmRNA的表达水平,结果显示,健脾清热活血方及叶酸片均可上调LYZmRNA及SSTmRNA的表达水平,健脾清热活血方（治疗前-治疗后）P=0.029,叶酸片组（治疗前-治疗后）P=0.00,差异具有统计学意义。结论:1.5个mRNA可能在慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化中发挥作用。其中,LYZmRNA及SSTmRNA经初步验证明确其在慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化中具有重要作用。2.健脾清热活血法及叶酸片临床治疗慢性萎缩性胃炎有效,可有效改善胃黏膜萎缩、肠化等胃黏膜病变,其可能通过上调LYZmRNA及SSTmRNA的表达水平而发挥阻断慢性萎缩性胃炎“炎-癌”转化的治疗作用。