口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是引起偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病,严重影响世界畜牧业的发展。发达国家防控FMD主要是捕杀感染动物,我国对FMD的防控措施主要是疫苗免疫,FMD的快速诊断对FMD的防控至关重要。为了能快速特异性诊断FMD,本研究制备到O型FMDV的单克隆抗体,通过大量制备腹水,并将抗体纯化和标记HRP,命名为2B5-HRP。应用2B5-HRP建立固相竞争ELISA(SPCE)检测方法,结果表明,成功制备到针对O型FMDV的特异性单抗,SPCE检测血清的最佳稀释度为1:8,PI=40为反应的临界值。敏感性和特异性是评价诊断方法的重要指标,用180份FMD阳性血清检测SPCE的敏感性,其中176份为阳性,敏感性为97.8%。特异性试验检测273份FMD阴性血清,其中268份为阴性,特异性为98.2%。SPCE与LPB-ELISA、VDPro及PrioCHECK的符合率均高于95%。批内和批间重复试验良好,SPCE和LPB-ELISA检测免疫动物抗体水平基本相符。本试验建立的SPCE方法的敏感性和特异性较好,能特异性诊断O型FMD,可用于FMD的规模化检测,为FMD的流行病学调查提供了新的手段。为了建立快速特异性检测O型FMDV方法,本研究以O型兔抗为包被抗原,以单抗2B5-HRP的检测抗体建立了双抗夹心ELISA检测方法。特异性结果显示,建立的ELISA方法与猪水疱病病毒、A型和Asia-I型FMDV均无交叉性反应。敏感性结果与rRT-PCR检测结果相符,批内和批间重复性好。本试验建立的双抗夹心ELISA检测方法可用O型FMDV的检测,为FMDV的流行病学调查和控制提供了技术手段。