花生2s清蛋白在种子发育和受黄曲霉侵染过程中的累积、动员及活性研究

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以花生(Arrachis hypogaea L.)汕油523种子为材料,在实验室前期研究的基础上,对花生种子2s清蛋白在发育阶段和受黄曲霉侵染过程中的组成型分析和胰蛋白酶抑制活性特点进行研究。   对发育过程中花生子叶2s清蛋白累积情况进行研究发现,2s清蛋白随着种子发育时间的延长,其含量逐渐上升,并在发育40 d后开始大量累积。利用明胶电泳检测发现,随着发育天数的增加,天然状态和亚基状态下2s清蛋白的抑制活性都逐渐增强。在天然状态下,有两条蛋白条带显示出抑制活性;在亚基状态下,有一条蛋白带显示出抑制活性。双向电泳结果显示,2s清蛋白中各蛋白点在发育过程中,丰度均上升,在发育64 d时达到最大值。   通过对受黄曲霉菌侵染花生2s清蛋白进行研究发现,有种皮和去种皮花生在受黄曲霉菌侵染过程中,蛋白含量和抑制活性总体呈下降趋势。但去种皮花生2s清蛋白中某组分在受黄曲霉菌侵染3~5 d时蛋白含量和胰蛋白酶抑制活性明显上升。并通过与对照实验比较推测,花生产生这种变化是其为抵御黄曲霉的侵染而做出的应答。   利用还原剂对2s清蛋白分子量影响和双向电泳结果进一步证实了,去种皮花生在受黄曲霉菌侵染3~5 d中,这条蛋白含量和胰蛋白酶抑制活性都突然上升的蛋白条带是2s-3,双向电泳结果显示,2s-4,2s-5中的蛋白组分在受黄曲霉菌侵染过程中,丰度逐渐下降,2s-2中的蛋白点(ssp3301、ssp1301)和新增蛋白点(ssp4302、ssp7302)的丰度大致呈上升趋势。   利用Native-PAGE转二向明胶SDS-PAGE得知,2s-3中有两个蛋白点具有抑制活性,且2s-3c的抑制活性高于2s-3a。通过在原有基础上建立一种更优化的双向电泳方法,以使2s清蛋白各组分得到更彻底的分离。通过质谱鉴定,最后得到2s-3a为Ara h6,2s-3c为PR-10。  
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