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本研究以鸡胚为实验材料,采用胰酶消化、Ficoll密度梯度离心法提取发育至第19期和第28期胚胎性腺中的原始生殖细胞(primordial germ cells ,PGCs),之后采用DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和DMEM等冷冻保护剂组成的6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液,经慢速冷冻程序(40C平衡45～50min,棉花包裹冷冻管液氮面上过夜,投入液氮)和玻璃化冷冻程序(40C平衡5 min,液氮面上静置1 min,投入液氮)进行超低温冷冻保存。6种慢速冷冻保护液类型分别为:I:10%DMSO+10%FBS+DMEM;II:10%EG+10%FBS+DMEM;III:5%DMSO+5%EG+10%FBS +DMEM;IV:10%DMSO +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM;V:10%EG +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM;VI:5%DMSO+5%EG +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM6种玻璃化冷冻保护液类型分别为:I:10%DMSO+10%EG+10%PVP+20%FBS+DMEM;II:20%EG+10%PVP+20%FBS+DMEM;III:20%DMSO+10%PVP+20%FBS+DMEM;