论文部分内容阅读
本论文共包括两部分工作：一部分是对解淀粉芽胞杆菌WH1的发酵条件以及WH1对油茶炭疽病的防治效果进行了研究；另一部分是对WH1发酵产生的脂肽物质的体内抗肿瘤效果进行了研究。1.芽胞杆菌产生的脂肽类物质可以通过作用于真菌细胞的细胞膜引起膜穿孔和诱导真菌细胞程序性凋亡的方式抑制真菌的生长。解淀粉芽胞杆菌WH1是从水稻根部分离到的一株产脂肽芽胞杆菌,发酵液中的脂肽类活性物质对真菌有广谱的抗性。本实验研究发现在平板抑制试验中,WH1发酵液能够使油茶炭疽病菌丝畸形,从而抑制油茶炭疽病的生长。离体叶片防治实验显示,稀释至原体积50倍的发酵液对离体油茶叶片上的炭疽病防效仍然非常显著。把WH1作为防治油茶炭疽病的专用生物农药,通过Plackett-Burman设计、单因素实验和田口设计对WH1的发酵条件进行了优化。Plackett-Burman设计结果显示,在所筛选的培养基成分中,豆粕粉、NH4NO3、Na2HPO4和温度对脂肽产量存在显著影响；通过单因素实验分别对主要影响因素进行了优化,最后通过田口设计,综合培养基成本等因素,得到培养基各因子的最佳水平组合为豆粕粉12g/L, NH4NO32 g/L, Na2HPO4 2g/L,淀粉15g/L。发酵过程放大依次在3L、20L和500L的发酵罐中进行,成功完成了250 mL摇瓶到500L罐的放大。500L罐上培养48h后发酵液十倍稀释液在PDA平板上的抑菌率为50.8%,对发酵液进行浓缩和喷雾干燥后药效存留率为86.2%。田间苗圃实验证明,WH1粉剂对油茶炭疽病的防效显著高于常用化学杀菌剂。2.脂肽类表面活性素一直以来被报道有很强的抗肿瘤活性,本研究通过MTT实验证实,表面活性素类脂肽WH1 fungin可以体外抑制肿瘤细胞的生长,但是溶血实验证明,WH1 fungin有很强的溶血活性。实验通过灌胃和腹腔注射脂肽分别研究了脂肽对腹水瘤和实体瘤的抑制效果,结果显示表面活性素直接通过灌胃和腹腔注射脂肽不能减少腹水瘤引起的死亡或者减缓实体瘤的生长。单纯通过脂肽治疗肿瘤无显著效果。