核因子-κB(nuclearfactor-kappaB，NF-κB)是一种重要的核转录因子，静息状态下通常与其抑制物IκB以无活性的复合物形式存在于细胞胞浆中。脑缺血及再灌注时，NF-κB可被多种因素激活，但NF-κB在脑缺血及再灌注损伤中的作用还有争议。目前纳洛酮已广泛用于急性神经系统损害的临床治疗，但基础研究相对较少，且具体作用机制尚不清楚。本研究探讨代表NF-κB活性的亚基P65及其抑制物I-κBα在脑缺血及再灌注早期的活性变化，并观察纳洛酮对其影响及意义。 第一部分小鼠脑缺血再灌注早期NF-κB活性变化及意义目的研究小鼠脑缺血再灌注早期核转录因子-κB(NF-κB)的亚基P65及其抑制物I-κBα的mRNA表达和其蛋白活性及作用。 方法(1)采用小鼠脑缺血再灌注损伤模型，记录不同时期小鼠异常神经症状。 (2)用RT-PCR技术检测小鼠脑缺血再灌注后不同时期脑组织NF-κBP65亚单位及其抑制因子-κBα(I-κBα)的mRNA表达。 (3)用免疫组织化学法检测小鼠脑缺血再灌注后不同时期脑组织NF-κBP65亚单位和I-κBα的蛋白质活性变化。 结果(1)小鼠脑缺血再灌注后30min脑组织NF-κBP65蛋白质活性增加，2h达高峰，24h仍维持较高水平(均P＜0.05)，而NF-κBP65mRNA的表达在各观察时间点无明显改变(均P＞0.05)。 (2)小鼠脑组织I-κB-α蛋白质活性水平于脑缺血再灌注后30min下降，2h达最低(均P＜0.05)，以后逐渐恢复正常，I-κBαmRNA的表达与其蛋白活性水平相一致(r=0.748；P＜0.05)。 (3)小鼠脑缺血再灌注早期脑组织NF-κBP65蛋白质活性变化与小鼠异常神经症状呈正相关(r=0.826；P＜0.05)，脑组织I-κBα的蛋白质活性及其mRNA的表达与小鼠异常神经症状均呈负相关(r蛋白=-0.743；rmRNA=-0.667,均P＜0.05)，NF-κBP65与I-κBα的蛋白质活性水平负相关(r=-0.820；P＜0.05)。 结论(1)小鼠脑缺血再灌注早期脑组织中存在NF-κBP65亚单位的激活和其抑制物I-κBα的减少，且以2小时为最明显。 (2)NF-κB激活可能参与了脑缺血再灌注早期的损伤过程。 第二部分纳洛酮对小鼠脑缺血再灌注损伤早期的脑保护作用及机制目的探讨纳洛酮在脑缺血再灌注损伤时的保护作用及可能的影响机制。 方法(1)实验小鼠随机分为三组：假手术组，实验(缺血再灌注2h)组和纳洛酮预处理组。记录小鼠异常神经症状。 (2)用RT-PCR技术检测各组小鼠脑组织NF-κBP65亚单位及其抑制因子-κBα(I-κBα)的mRNA表达。 (3)用免疫组织化学法检测各组小鼠脑组织NF-κBP65亚单位和I-κBα的蛋白质活性变化。 结果(1)小鼠脑缺血再灌注2h组脑组织NF-κBP65蛋白质活性水平明显高于假手术组(P＜0.05)；纳洛酮预处理组脑组织NF-κBP65蛋白质活性水平低于实验组(P＜0.05)；但纳洛酮预处理组脑组织NF-κBP65蛋白质活性水平高于假手术组(P＜0.05)。三组小鼠脑组织NF-κBP65mRNA的表达无统计学差异(p＞0.05)。 (2)小鼠脑缺血再灌注2h组脑组织I-κBαmRNA的表达及其蛋白质活性水平明显低于假手术组(均P＜0.05)，纳洛酮预处理组脑组织I-κBαmRNA的表达及其蛋白质活性水平高于实验组(均P＜0.05)；但纳洛酮预处理组脑组织I-κBαmRNA的表达及其蛋白质活性水平仍低于假手术组(P＜0.05)。 (3)小鼠脑缺血再灌注后2h组的小鼠异常神经症状评分高于假手术组(P＜0.05)；纳洛酮预处理组的小鼠异常神经症状评分较再灌注后2h组明显改善(P＜0.05)；但纳洛酮预处理组的小鼠异常神经症状评分仍高于假手术组(P＜0.05)。 结论纳洛酮能降低小鼠脑缺血再灌注早期损伤的脑组织NF-κB活性，这可能是其减轻脑缺血再灌注早期损伤的重要机制之一。 第三部分急性脑梗塞外周血单核细胞NF-κB表达及纳洛酮的影响目的寻找外周血单核细胞与急性脑缺血损伤的关系，探讨纳洛酮对外周血单核细胞核因子-κBP65亚基及其抑制物I-κBαmRNA表达的影响和治疗急性脑梗塞的可能又一脑保护机制。 方法(1)采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心及贴壁培养法对21例急性脑梗塞患者和21例单纯高血压者周围血单核细胞分离、纯化后，分为原液组、纳洛酮处理组并培养24小时。 (2)对急性脑梗塞患者进行临床神经功能缺损评分。 (3)用RT-PCR技术检测各组外周血单核细胞NF-κBP65亚单位及其抑制因子-κBα(I-κBα)的mRNA表达。 结果(1)急性脑梗塞组外周血培养的单核细胞NF-κBP65mRNA的表达水平高于单纯高血压组(P＜0.05)；而其I-κBαmRNA的表达低于单纯高血压组(P＜0.05)。在急性脑梗塞患者中，纳洛酮处理组的单核细胞NF-κBP65mRNA的表达水平低于对照组(P＜0.05)；而I-κBαmRNA的表达水平高于对照组(P＜0.05)。纳洛酮对单纯高血压患者外周血培养的单核细胞NF-κBP65、I-κBαmRNA的表达无明显影响(均p＞0.05)。 (2)急性脑梗塞患者外周血单核细胞NF-κBP65mRNA的表达水平与其临床神经功能缺损评分呈正相关(r=0.695，P＜0.05)；I-κBαmRNA的表达水平与其临床神经功能缺损评分均呈负相关(r=-0.522，P＜0.05)；NF-κBP65mRNA与I-κBαmRNA的表达水平呈负相(r=-0.648；P＜0.05)。 结论(1)急性脑梗塞患者外周血单核细胞存在NF-κBP65mRNA的表达增加及其抑制物I-κBαmRNA的表达降低； (2)外周血单核细胞源性NF-κB的活性增强可能参与了急性脑梗塞后脑损伤过程。 (3)纳洛酮抑制急性脑梗塞患者外周血单核细胞NF-κB的活性可能是其治疗急性脑梗塞的机制之一。 (4)纳洛酮不能抑制单纯高血压患者外周血单核细胞NF-κB的活性