论文部分内容阅读
番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近几年在我国新发生的一种病毒,中国大陆2013年首次在北京地区设施番茄上发现并报道该病毒。由于寄主范围广泛,传播介体烟粉虱难防控,ToCV迅速在我国发展蔓延,目前全国范围内13个省区已有报道。感染ToCV的植株长势弱、果实小、商品性下降,对我国番茄产业造成严重的经济损失。为明确山西、内蒙古、辽宁和吉林四省区ToCV的发生情况,以便及早采取防控措施,本研究利用分子生物学方法,对采自上述地区的123份番茄样品进行ToCV分子鉴定,检出4份阳性样品,首次确定并报道了ToCV在山西、内蒙古、辽宁和吉林四省区的发生。CP、Hsp70h序列的核苷酸、氨基酸相似性分析和系统进化树表明四省区分离物与中国其他地区分离物的核苷酸、氨基酸相似性较高,亲缘关系较近。四省区的ToCV检出率均较低,推测ToCV在上述四省区处于病害发展的初始阶段,尚未对番茄产业造成明显损失。由于该病害具有流行速度快、传播范围广的特点,当地各部门要引起重视,警惕ToCV的流行爆发。目前对ToCV的研究多限于检测鉴定、检测方法优化、进化分析等研究,对于ToCV与寄主植物互作的研究较少,对其致病机理不甚了解。本研究以ToCV RNA1编码的沉默抑制子p22作为诱饵蛋白,运用酵母双杂交的方法从番茄cDNA文库中筛选与其互作的寄主蛋白,以期为ToCV的致病性研究提供参考。在193个克隆中筛选得到19个候选蛋白,经生物信息学分析,选取重复多次、包含了完整阅读框且各重复间氨基酸相似性为100%的候选蛋白S期激酶相关蛋白1(S-phase kinase-associated protein 1,SKP1)做进一步互作验证。通过酵母回转验证、双分子荧光互补实验证明了p22与NbSKP1.1互作,与NbSKP1.2、NbSKP1.3、NbSKP1L1均不能互作。为进一步明确p22与NbSKP1.1互作的关键区域,分析NbSKP1.1与p22的互作对病毒致病性、寄主植物生理代谢的影响,根据SKP1的解析结构,将其全长155个氨基酸分为N端结构域(aa 1-98)和C端结构域(aa 99-155),分别与p22做酵母双杂交回转验证,结果发现NbSKP1.1的C端结构域可以与p22在酵母体内互作,而N端不能与p22互作。