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研究目的探讨hsa-miR-1827对肺腺癌A549细胞系迁移、增殖能力的影响以及对原癌基因c-Myc是否有调控作用。研究方法1.使用TargetScan7.2、DIANA-LAB在线miRNA靶基因预测软件对hsa-miR-1827 与 c-Myc 基因 mRNA 3’非翻译区(untranslated region,UTR)的配对关系进行预测。使用TargetS can7.2、DIANA-LAB、miRDB分别预测hsa-miR-1827的靶基因并使用Vnney2.1取交集得到靶基因集合,后对其进行KEGG通路分析。检索并使用GEO数据库的芯片数据对hsa-miR-1827表达量与肺腺癌患者的预后、分期之间的关系进行探索。2.使用脂质体瞬时转染的方法将hsa-miR-1827类似物导入A549细胞系,使A549 细胞过表达 hsa-miR-1827。Real-Time 定量 PCR 检测转染后 hsa-miR-1827以及c-Myc mRNA的表达量,Western Blot法检测c-Myc蛋白表达量的变化,细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检验hsa-miR-1827对A549迁移能力的影响,细胞增殖CCK-8实验鉴定hsa-miR-1827对A549增殖能力的影响,以上均以转染miR-NC序列的A549细胞作为实验对照。3.使用双荧光素酶报告基因实验探究hsa-miR-1827对c-Myc是否存在直接调控关系并对具体配对结合部位进行鉴定。研究结果1.在线生物信息学网站TargetScan7.2、DIANA-LAB显示hsa-miR-1827种子序列与c-Myc mRNA 3’ UTR区存在完全配对序列。经过靶基因预测及KEGG通路分析,提示部分has-miR-1827的靶基因直接或间接参与肿瘤发生、进展。GEO芯片GSE63805数据分析显示高表达hsa-miR-1827的肺腺癌患者术后10年总生存率为37.5%,显著优于低表达hsa-miR-1827患者的6.25%。hsa-miR-1827表达量随分期增加有下降的趋势。2.与miR-NC转染组相比,hsa-miR-1827转染组hsa-miR-1827表达量显著上调,c-Myc mRNA以及蛋白水平均明显下降。细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验提示hsa-miR-1827可以显著抑制A549的迁移能力。细胞增殖实验提示hsa-miR-1827对细胞增殖能力无显著影响。3.双荧光素酶报告基因实验提示hsa-miR-1827直接通过与c-Myc mRNA 3’UTR(第139-146位碱基)互补配对结合来调控c-Myc的表达。结论hsa-miR-1827能靶向调控肺腺癌原癌基因c-Myc的表达并抑制A549细胞系迁移。