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近年来农田土壤Cd污染已成为我国最严重的土壤环境问题之一,已严重危及农产品安全及通过食物链威胁人体健康。植物修复是目前Cd污染土壤修复的研究热点之一,但其修复效率受土壤Cd生物有效性的制约。已研究发现,产酸菌具有活化土壤Cd的潜力,从而大幅度提升植物修复Cd污染土壤的效率。基于此,本研究以巨大芽孢杆菌和印度芥菜为试材,研究微生物—植物联合作用对印度芥菜富集Cd的影响。首先开展短期和长期土培试验,明确巨大芽孢杆菌用于土壤Cd活化的可行性,进一步开展土培试验,研究巨大芽孢杆菌对土壤Cd的活化效果及适宜的接菌量及培养时间条件;其次,以巨大芽孢杆菌和印度芥菜为供试材料,开展印度芥菜盆栽试验,明确巨大芽孢杆菌和印度芥菜联合作用对土壤Cd形态转化的影响;再次,采用土培根际试验,分析接菌处理后印度芥菜根际与非根际土壤中低分子有机酸、土壤酶活性等影响印度芥菜富集土壤Cd的因子的变化;进而,采用水培试验,分析水培条件下巨大芽孢杆菌对营养液中印度芥菜富集Cd的影响规律;最后综合分析土培和水培条件下巨大芽孢杆菌对印度芥菜富集Cd能力及其影响因子的差异,揭示巨大芽孢杆菌促进印度芥菜富集Cd的影响机制,为筛选活化土壤Cd的微生物,创建植物—微生物联合修复技术奠定科学基础。主要研究结果如下: 1、明确了巨大芽孢杆菌对土壤Cd具有活化作用。以巨大芽孢杆菌为研究对象,以胶冻样类芽孢杆菌为参比菌,开展两种菌液用于不同Cd胁迫土壤的恒温培养试验,结果表明,巨大芽孢杆菌可增加土壤中DTPA提取态Cd(DTPA-Cd)含量,且对相对低Cd污染水平土壤Cd的活化效果更为明显;短期培养84 h后接菌处理的土壤DTPA-Cd较对照增加24.3%,长期培养60 d后接菌处理的土壤DTPA-Cd增加44.0%;而胶冻样类芽孢杆菌及两菌混合液对土壤Cd有一定钝化作用。综上,土培条件下巨大芽孢杆菌可增加土壤Cd有效性。 2、明确了巨大芽孢杆菌对土壤Cd的活化程度及适宜接菌量及培养时间条件。巨大芽孢杆菌发酵液与与土重比为1∶1.5、培养24 h时,土壤DTPA-Cd增加14.2%;巨大芽孢杆菌种子液接种量为土重5%、培养25d时,发酵液接种量为土重5%、培养40 d时,土壤DTPA-Cd较对照分别增加11.4%,19.6%;胶冻样类芽孢杆菌及混合菌各处理的DTPA-Cd较对照减少或与对照无显著差异。综上,短期培养条件下菌土比为1.5∶1,培养24h~48h,长期培养条件下,接菌量为土重5%,培养25d~40d时,巨大芽孢杆菌对土壤Cd活化效果较好。 3、巨大芽孢杆菌可促进印度芥菜的生长,同时增加土壤Cd的生物有效性,从而增加印度芥菜对Cd的富集。结果表明,接菌量为土重1%~4%时,印度芥菜地上部干重较对照最高提高56.67%,地上部Cd含量较对照提高达53.7%;接菌处理印度芥菜Cd富集量较对照最高增加74.7~111.1%;1%接菌量处理的土壤过氧化氢酶、脲酶活性较对照增加,既可改善土壤养分,又可缓解环境毒害,从而促进印度芥菜的生长;通过对不同形态Cd含量分析发现,巨大芽孢杆菌与印度芥菜联合作用下,碳酸盐结合态Cd及铁锰结合态Cd转化为可交换态Cd;根际与非根际土壤草酸含量与DTPA-Cd含量呈显著正相关关系,草酸对土壤Cd起到了活化作用从而增加了土壤DTPA-Cd含量;根际土壤中5%接菌量处理>对照>1%接菌量处理的草酸含量,而非根际土壤中5%接菌量处理>1%接菌量处理>对照的草酸含量,说明巨大芽孢杆菌是草酸重要来源,1%接菌量处理的根际土中,Cd与草酸络合后更多的被印度芥菜吸收,导致其含量下降。综上,接菌量为土重1%~4%时,巨大芽孢杆菌可增加土壤过氧化氢酶、脲酶活性从而促进印度芥菜生长,同时增加土壤草酸含量从而增加土壤Cd的生物有效性,因此促进了印度芥菜对土壤Cd的富集。 4、水培环境中巨大芽孢杆菌与印度芥菜联合作用也促进了印度芥菜对Cd的富集。接菌处理的印度芥菜地上部和地下部Cd含量均高于未接菌处理,接菌后培养15d,20 d时,接菌处理的印度芥菜对Cd的富集量大于未接菌处理,接菌处理的地下部和地上部对Cd的富集量比对照分别提高高达51.34%,94.94%。营养液中7种有机酸的变化趋势各有特点,且均有一定的升降波动,酒石酸主要来源于菌体分泌,Cd对菌体的胁迫作用增加了乙酸分泌,琥珀酸则主要是源于印度芥菜根系分泌物,且Cd对根系分泌琥珀酸起到了诱导作用。印度芥菜Cd含量与营养液中草酸、丙二酸呈显著正相关关系,主要是这两种有机酸促进了印度芥菜对营养液中Cd的富集。综上,水培环境中,巨大芽孢杆菌和印度芥菜联合作用下,促进了小分子有机酸的分泌从而增加了印度芥菜对Cd的富集量。 5、土培印度芥菜时,土壤Cd主要是被印度芥菜地上部富集,印度芥菜地上部中Cd的富集量占总富集量的85.9%~96.5%。水培印度芥菜时,营养液中的Cd主要是被印度芥菜地下部富集,接菌处理的地下部对Cd的富集量占总富集量的57.80%~71.99%,未接菌处理的地下部对Cd的富集量占总富集量的54.34%~76.94%,且Cd被印度芥菜富集后在印度芥菜生长到一定阶段有可能再次释放出来。综上,土培和水培条件下,虽然Cd在印度芥菜中的主要富集部位不同,但巨大芽孢杆菌均可促进印度芥菜对Cd的富集。 综上所述,本文明确了巨大芽孢杆菌用于土壤Cd活化的可行性,并筛选出巨大芽孢杆菌活化土壤Cd的适宜接菌量为土重的5%左右,培养时间为25d~40d;阐明了巨大芽孢杆菌通过影响土壤过氧化氢酶、脲酶活性及草酸含量促进了印度芥菜对土壤Cd的富集;初步揭示了巨大芽孢杆菌和印度芥菜联合作用促进印度芥菜对Cd富集的机制。