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目的:构建细粒棘球绦虫重组BCG-EgG1Y162,并对其蛋白进行表达、分析以及免疫应答特性研究。方法:PCR扩增egG1Y162抗原编码基因;将该扩增产物定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361中,构建重组质粒pMV361-EgG1Y162;利用电穿孔法分别将重组质粒pMV361-EgG1Y162和空质粒pMV361转化入BCG中,构建细粒棘球绦虫重组质粒BCG-EgG1Y162和BCG-pMV361。PCR扩增、酶切、测序鉴定后,45℃热诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定。利用EgG1Y162的家兔多克隆血清免疫印迹法鉴定重组BCG-EgG1Y162蛋白。分别用细粒棘球蚴感染的犬血清和细粒棘球蚴病人的血清与重组BCG-EgG1Y162蛋白进行反应分析其抗原特性。分别用BCG-pMV361,rBCG-EgG1Y162,生理盐水免疫BALB/c小鼠,免疫前后取血,用ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgE抗体水平;末次免疫后2周取脾淋巴细胞作体外培养,CCK-8法体外检测脾淋巴细胞增殖活性。结果:PCR成功扩增出360bp的egG1Y162抗原编码基因;双酶切证实egG1Y162抗原编码基因成功插入pMV361中;PCR及酶切证实rBCG-EgG1Y162构建成功;rBCG-EgG1Y162热诱导表达出相对分子质量约71kda处特异条带,而BCG-pMV361未出现目的条带;用EgG1Y162家兔多克隆血清免疫印迹分析发现rBCG-EgG1Y162的表达产物在相对分子质量(Mr)约为71KDA处有明显的目的蛋白表达条带,且能分别与细粒棘球蚴感染的犬血清,细粒棘球蚴病人的血清发生特异性免疫反应。免疫原性试验表明rBCG-EgG1Y162免疫后6周后小鼠IgG1,IgG2a,IgG2b抗体亚类水平高于对照组,与BCG-pMV361组和生理盐水组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);体外脾淋巴细胞增殖实验证实rBCG-EgG1Y162可引起细胞增殖反应,其增殖活性与BCG-pMV361组和生理盐水组相比差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论:成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒BCG-EgG1Y162,能高水平的表达蛋白;rBCG-EgG1Y162可引起体外脾淋巴细胞增殖;rBCG-EgG1Y162能刺激机体产生高水平IgG1,IgG2a,IgG2b抗体,诱导细胞免疫和体液免疫应答,具有较好的免疫原性。本研究为包虫病预防性疫苗的研制奠定了理论及实验基础。