肿节风诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的体内外实验研究

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目的研究肿节风对体外、体内结肠癌HCT-8细胞凋亡的生物学效应,为研究治疗结肠癌的术前及术后的常规放疗及化疗的辅助用药提供理论基础。方法1.体外实验:体外常规培养HCT-8;设立低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白对照组;各实验组均根据不同剂量加入肿节风注射液。应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测加入不同剂量肿节风注射液后24h、48h和72h后各组肿瘤细胞生长抑制情况;用细胞克隆形成实验将细胞加入不同浓度的肿节风后再连续培养12天后进行上级检测,计算细胞的克隆形成率。Annexin V/PI检测肿瘤细胞与肿节风注射液反应24h后的凋亡情况。2.体内实验:选取4周龄BLAB/C裸鼠,收集对数生长期的结肠癌HCT-8细胞,将1×106个结肠癌细胞株移植于裸鼠背部建立移植瘤模型,将模型鼠分空白组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;每组10只。治疗后第3d开始观察肿瘤动态生长情况;连续观察21天,与给药后25d处死老鼠,迅速剥离瘤体,测量肿瘤体积,利用细胞原位末端标记技术(TUNEL)检测瘤体内细胞凋亡情况。进行统计学分析。结果1.体外实验:低剂量组对结肠癌HCT-8细胞没有明显的生长抑制作用。MTT显示同样的作用时间下,中剂量组及高剂量组肿瘤细胞抑制率比较差异有显著统计学意义(P<0.01),治疗48h、72h后高剂量组与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞克隆形成实验显示高剂量组对肿瘤细胞生长的抑制作用较为明显,各加药组与空白对照组相比有显著差异(P<0.05)。Annexin V/PI显示,随着肿节风浓度的增加,HCT-8细胞的凋亡率也呈现上升趋势,空白对照组与加药组比较差异有显著统计学意义(P<0.05)。2.体内实验:第4d开始,高剂量组的瘤体体积与低剂量组和空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);第8d开始,高剂量组的瘤体体积与其他三组相比均具有显著性差异(P<0.01)。TUNEL法检测结果显示高剂量组与其他三组相比肿瘤细胞凋亡指数间均有显著性差异(P<0.01),低剂量组与空白对照组相比肿瘤细胞凋亡指数间无统计学意义(P>0.05)。结论肿节风对结肠癌HCT-8肿瘤细胞具有诱导凋亡的作用。
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