论文部分内容阅读
目的: 探讨是否能从肾透明细胞癌 (clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)患者尿液中提取出USCs(R-USCs),并从该类细胞中找到受肿瘤影响而发生变化的异常USCs。 方法: 收集肾癌患者新鲜尿液,对得到的单个贴壁细胞进行培养。倒置显微镜观察R-USCs形态,流式细胞术检测干细胞表面标记物。诱导R-USCs向尿路上皮细胞和平滑肌细胞分化,并用免疫荧光观察相应标记物。观察细胞克隆形成,绘制细胞增殖曲线,分析细胞周期及凋亡。观察细胞划痕、侵袭、迁移,RT-qPCR检测PAX2、ALDH1、NCAM1、SIX2肿瘤相关基因。所有实验均用正常尿源性干细胞(hUSCs)作为对照组。 结果: 通过原代培养得到R-USCs,其外观呈“米粒状”,干细胞表面标记物CD73、CD90、CD146均呈阳性;免疫荧光显示尿路上皮细胞标记物细胞角蛋白(AE1)和平滑肌细胞标记物α-平滑肌肌球蛋白(α-SMA)呈阳性表达。R-USCs增殖曲线呈“S”形,与hUSCs对比其增殖能力、克隆形成能力增强,凋亡现象减弱,其迁移、侵袭能力增强。RT-qPCR检测显示PAX2、ALDH1、NCAM1呈阳性表达。 结论: 本研究成功建立分离、培养肾癌患者尿源性干细胞的方法;并鉴定其生物学特性,为其后探讨肾癌的诊断、分类分期、治疗等提供技术支持。