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目的:以番木瓜和正安野木瓜为原料,筛选分离一种植物源性溶栓活性物质,对其进行初步研究。
方法:提取两种木瓜的蛋白粗提物,考马斯亮蓝G-250染色法测定样品蛋白浓度;对其进行盐析、透析,进一步经SP-sephadex G-75柱层析纯化收集蛋白峰;纤维蛋白平板法筛选溶栓活性成份;SDS-PAGE电泳法检测溶栓活性成份纯度及测定其分子量。
结果:番木瓜蛋白粗提物、盐析后样品及进一步经SP-sephadex G-75柱层析分离得到的4、5、6号样品对纤维蛋白平板都有溶解作用,且溶解作用随纯化程度提高逐渐加强;而野木瓜的蛋白粗提物、盐析后样品对纤维蛋白平板都没有溶解作用。番木瓜蛋白粗提物经SP-sephadex G-75柱层析分离得到的5号样品,以尿激酶为标准标定活力单位,其溶栓活性为17.85IU/mg;溶栓成份是通过直接降解纤维蛋白和激活纤溶酶原两种方式起作用的;经SDS-PAGE电泳得单-蛋白条带,分子量在26KD左右。
结论:番木瓜中含有溶栓活性物质而野木瓜中没有发现;番木瓜蛋白粗提物经盐析、透析、SP-sephadex G-75柱层析可以得到较纯的溶栓活性成份,分子量为26KD左右;此溶栓成份兼有直接降解纤维蛋白和激活纤溶酶原两种作用。