裂殖酵母SOD2基因的克隆和转基因拟南芥的培育

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盐胁迫下,植物细胞离子均衡受到破坏,尤其是胞质中过多的Na~+,对植物细胞的代谢产生毒害。植物细胞为适应胁迫环境,一方面积累可溶性有机物质;另一方面,尤其是盐生植物则通过Na~+排除或者区隔化、并调整K~+/Na~+比率的机制来消除Na~+的毒害。甜土植物拟南芥胞内离子区隔化控制基因AtNHX1及Na~+排除的基因SOS1均已克隆,并且AtNHX1在拟南芥中的过量表达显著提高了转基因植株的耐盐性,开创了降低Na~+毒害的基因操作新途径。SOD2在裂殖酵母中是控制Na~+外流的基因,对于保持裂殖酵母细胞的离子均衡非常重要。SOD2基因在拟南芥中的过量表达,对于细胞离子均衡可能具有重要意义。 本实验采用RT-PCR方法,扩增得到了裂殖酵母SOD2基因,将其克隆并进行序列分析,结果与国外报道的序列有四个碱基的差异。SOD2基因cDNA全长1404bp,编码一个约51kD的蛋白。将SOD2基因构建到植物表达载体pROK2中,导入农杆菌后,由渗透法进行植物遗传转化,并利用PCR进行了转基因植株的分子检测。
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