研究背景 哮喘的基本特征为慢性炎症和气道高反应性(AHR)。哮喘反复发作时存在的急慢性炎症过程可引起气道不可逆结构性改变，当出现气道上皮下基底膜网状结构(RBM)增厚和纤维化(subepithelium fibrosis)及平滑肌层增厚、血管增生扩张等改变时，称为气道重建。这就是临床上慢性持续性哮喘气流阻塞存在不可逆性成分的重要原因。气道重建形成的后果是对肺功能的影响及加重哮喘发作，影响疾病的转归，引起哮喘致死率的增加。气道重建的几个重要临床特征目前尚不十分清楚，如其开始的时间和速度，以及什么程度时这种重建能被抗炎药物或通过避免过敏原接触达到最大限度的逆转。靶向气道重建的治疗药物的研制，将可能产生新的抗哮喘药。在新药物问世前，早期应用或联合应用抗炎药物有效抗炎预防气道重建的发生，将显得更有意义。临床上由于取材困难等限制了气道重建的研究，因此，动物模型成为该研究领域的重要对象。本研究将为此提供实验依据。 研究目的 建立一种能更好反应人类哮喘特征的、具有气道重建病理改变的小鼠哮喘模型。动态观察气道壁重建之过程。联合应用激素与孟鲁司特干预，观察其对气道重建预防及治疗作用。 研究假设 致敏小鼠经过反复雾化吸入OVA激发，可出现气道壁、基底膜厚度持续性增加，反映在病理上为胶原、弹性蛋白沉积，平滑肌增生、肥大，上皮杯状细胞增生、粘液高分泌(气道重建)，这种改变以早期即已出现，随抗原激发时间延长，渐进性增加。早期应用ICS、LTRA等药物至少可部分预防上述过程的发生，联合应用两种药物将更好地抑制气道炎症及气道重建。 研究方法 选择雄性C57BL／6小鼠，年龄6-8周，体重18-22g，以鸡卵蛋白(OVA)作为抗原进行致敏和反复多次激发，每批实验均同时设立对照组(即以生理盐水代替OVA作为抗原)。在激发的不同时段(2w，4w，6w，8w，12w)分别测定BALF、外周血和骨髓中炎症细胞反应：测定上述液体上清液IL-5、INF-γ浓度：并进行组织病理学检查。在此基础上，早期联合孟鲁斯特灌胃与布地奈德雾化吸入给药，以探讨上述药物对哮喘小鼠气道重建的干预作用。 研究结果 批户人哆2003届硕。研究生学位论文删1．哮喘小鼠气道重建模型的建立：致敏小鼠在反复抗原激发后，气道内出现了以嗜酸性粒细胞（EOS）浸润为主的炎症反应，表现为 BALF中 EOS计数较生理盐水阴性对照组明显升高o 刀 1），伴随外周血、骨髓中EOS数升高（P＜0刀1），BALF、外周血IL5水平升高o＜口刀1），BALF中IFN－Y水平降低（P＜0刀1）；随着雾化时间的延长，BALF中EOS计数呈现下降趋势o＜0刀1）。除此，气道结构亦出现了改变：HE染色显示气道血管周围均可见大量Eos等炎症细胞浸洞，平滑肌层增厚；PAS染色显示气道上皮杯状细胞增生、粘液高分泌；Masson、三色显示气道基底膜及血管周胶原沉积。定量分析显示这种改变早期（ZW时）即已出现，炎症反应早期己经十分明显：随雾化时间的延长，在炎症包括杯状细胞增生及粘液高分泌状态持续存在的前提下，气道壁结构发生了越来越明显的改变，表现为平滑肌层及基底膜胶原渐进性增厚仔＜0刀1）。2．联合应用盂鲁斯特与布地奈德对气道炎症及气道重建的影响：首先确定孟鲁斯特灌胃及布地奈德雾化吸人抑制气道炎症的合适剂量及浓度。选择连续雾化吸入18次作为气道重建模型，在此基础上以合适浓度或剂量单独或联合应用孟鲁斯特或布地奈德进行干预。结果发现，与OVA阳性对照组比较，单独应用孟鲁斯特或布地奈德均能明显抑制BALF、外周血、骨髓的嗜酸性粒细胞数量仔＜0刀1），抑制率分别为80％或80％、50％或50％、40％或40％；降低＊＊u、外周血1卜5浓度伊＜0刀1），升高＊＊u中IF＊寸浓度o＜0刀1）；并能显著抑制气道重建指标如气道平滑肌增生、胶原沉积及粘液分泌、杯状细胞增生炉＜0．01）。联合应用两种药物能够更好的抑制BALF中EOS数目的增加，抑制率约95％，显著优于单用两种药物（P＜0．of），但对外周血及骨髓中EOS的抑制效果与单用差别不明显（P＞刀5），对细胞因子的影响亦出现了相似的结果（＞0刀5）；联合MON与BUD的MONSUD组较MON组和（或）BUD组对支气管周围EOS计数、气管平滑肌面积、杯状细胞占上皮细胞百分比、粘液分泌、胶原沉积的抑制效果更为明显o＜0刀1）。 结 论： 1．本研究在国内首次建立了致敏小鼠长期抗原激发所致气道重建模型。致敏小鼠经过反复抗原激发，气道重建逐步发生，其病理表现能够更好反映人类哮喘的特征。 2．早期应用盂鲁斯特或布地奈德不但能抑制哮喘时气道炎症反应，并且能预防气道重建的发生。 3．联合应用布地奈德和孟鲁司特对小鼠气道重建的预防作用较单独应用布地奈德或孟鲁司特效果更为显著。