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目的:由于血管内介入治疗的迅猛发展,越来越多的患者接受血管内介入治疗。在大多数的临床中心,80%的介入手术中都使用了血管支架。支架植入术后的再狭窄（In Stent Restenosis,ISR）目前仍是动脉介入治疗术后最严重的问题。前期研究结果表明基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）在支架植入后再狭窄过程中发挥了重要作用,并且外源性基质金属蛋白酶抑制剂可显著抑制MMPs的活性和平滑肌细胞的迁移增殖能力。本研究采用Z型金属支架及含GM6001的药物洗脱支架植入动物体内,在无创取出冷冻标本内的金属支架后,测量ISR期间MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的表达水平,VSMC的不同表型,主要的胶原含量,平滑肌细胞凋亡细胞百分比和新生内膜中血管平滑肌细胞密度。阐明ISR过程中MMPs在时间上和空间上的分布特征及变化规律、同时明确MMPs、TIMPs表达水平、VSMCs的功能演变、ECM代谢的变化,发现外源性MMPs抑制剂局部释放对MMP活性、VSMC数量及ECM代谢的影响程度及调控机制,为抑制ISR的研究开拓新的研究领域、提供新的客观依据。材料和方法:包含三个部分,第一部分为GM6001药物涂层支架的制备:将乳酸和羟基乙酸按不同比例溶于二甲基亚砜中,体外降解实验、药物浓度时间曲线测定及筛选涂层,筛选药物涂层稳定持续释放的聚乳酸-羟基乙酸共聚物支架涂层准备用于动物实验的GM6001洗脱支架和不含GM6001涂层的洗脱支架。裸支架部分由316L不锈钢丝制成的Z型支架,支架杆的直径为0.15mm,支架的直径为6mm,支架的长度为15mm。第二部分为动物分组,髂动脉支架植入及动脉标本组织获取:将42个GM6001洗脱支架随机植入广西巴马小型猪的左或右髂动脉,不含GM6001的支架植入对侧髂动脉形成对照组。根据处死时间（6小时、1、7、14、56、84和336天、空白对照）分为8组（每组6只）。获取髂动脉后,OCT液浸泡、包埋,在液氮罐冷冻保存,在冷冻状态下取出支架。再狭窄血管组织中段用冰冻切片机切取10um厚的冰冻切片。再狭窄血管组织两端提取蛋白用于Western Blotting。第三部分为标本染色及Western blotting:对各组切片分别进行苏木精伊红（Hematoxylin and eosin,HE）染色、免疫组化染色、天狼星红染色、末端脱氧核苷酸转移酶d UTP标记染色（Terminal deoxynucleotidyl transferase d UTP nick end labeling staining,TUNEL）。分析再狭窄动脉的形态、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、IMP-2、MYH-10（增殖表型血管平滑肌标志）、SM22α（收缩表型血管平滑肌标志）、细胞凋亡及不同成熟状态胶原在ISR组织的分布变化趋势。结果:1.选择出药物释放平稳、释放持续时间达3个月以上的涂层PLGA乳酸和羟基乙酸比例为70/30,制作出直径6mm含GM6001（载GM6001量为5μg/mm2）和不含GM6001涂层支架用于后续动物实验。2.实验动脉各组的初始体重、血糖和血脂等基线指标无统计学差异（P>0.05）。所有实验动物均为雄性,为排除雌激素对动脉硬化的保护效应。动物喂食为实验室高脂饮食饲养,增加动物模型发生再狭窄的几率。植入支架的髂动脉取出后,在冷冻状态下,暴露出支架两端的连接点,使用镊子去除所有连接点,从而使支架的所有支柱彼此分离并且,不破坏血管组织结构的情况下将支柱纵向拉出,将血管壁内的Z型支架成功移出。3.HE染色显示在对照组的第1天和GM6001组的第7天和第14天,血管管腔内有临时性基质形成。对照组从第14天开始可以观察到新生内膜。GM6001组中新生内膜的出现要晚于对照组为第56天。从7天到336天,与对照组相比,GM6001组的血管腔面积显著增加,新生内膜面积明显减少（P<0.05）。免疫组化结果显示:MMP-2、MMP-9、SM22α、MYH-10、TIMP-1、TIMP-2均较多分布于中膜靠近内弹力膜、内膜受损部位、支架杆周围或内膜表面。在这两组中,MMP-2和MMP-9的表达同时达到峰值,但GM6001洗脱支架显着抑制了血管中膜、新生内膜尤其是支架杆周围中MMP-2和MMP-9的表达（P<0.05）。在GM6001组中TIMP-1、TIMP-2、MYH-10的表达相比于对照组也显著降低（P<0.05）。两组SM22α的表达无明显差异（P>0.05）。TUNEL结果显示:在新生内膜中,凋亡细胞的百分比和细胞密度随时间逐渐降低。GM6001组的凋亡百分比和细胞密度显著低于对照组（P<0.05）。天狼猩红染色结果显示:新生内膜中成熟胶原的含量随时间的增加而增加。在对照组中,未成熟胶原蛋白的含量从56天开始逐渐下降,但在GM6001组中,未成熟胶原蛋白的含量在84天达到最大值后下降。GM6001组中未成熟胶原蛋白和成熟胶原蛋白的含量均显著低于对照组（P<0.05）。结论:1.使用GM6001洗脱支架可以抑制中膜和新生内膜中的MMP-2和MMP-9的表达。2.GM6001洗脱支架使新生内膜中VSMCs的数量减少,并且使新生内膜中ECM的主要成分胶原含量显著减少。3.GM6001洗脱支架可持久有效地抑制新生内膜增生,增加动脉管腔面积。我们的研究为ISR期间局部释放外源性MMPI调节MMP活性、VSMCs和ECM代谢能够抑制支架再狭窄提供了理论基础。