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人血清白蛋白(HSA)的传统生产方法——冷乙醇沉淀法由于所得产品纯度不高,生产周期长,劳动强度大,已逐渐不能满足越来越高的产品质量要求,但其灭菌消毒作用则是一大优点.现代层析技术的广泛使用为HSA的纯化方法开辟了新思路.而将层析技术结合冷乙醇沉淀用于HSA的纯化则可以有效利用二者各自的优点,并能很好的避免二者的不足之处.本文采用将层析技术与冷乙醇沉淀方法相结合的工艺思路用于HSA的纯化,得到一条纯度高、收率理想、周期短的HSA纯化新路线.首先将冰冻血浆冻融离心后进行了一步冷乙醇沉淀,采用的方法为Kistler和Nitschmann改良法,并将该法的前两步乙醇沉淀合并为一步,以缩短处理时间,提高工艺集成化程度,冷乙醇沉淀后离心所得上清用于下一步制备HSA的原料,沉淀可用于制备IgG.该步骤HSA收率为95.5％,纯度由冻融离心后的59％提高到76.5％.对冷乙醇沉淀后所得上清先进行了一步脱盐脱乙醇处理,以除去其中的乙醇和盐分对后续层析的影响,采用的介质为Sephadex G25.脱盐脱乙醇后的含HSA组分进行了第一步层析处理,通过比较选用了CM Sepharose FF作为纯化的介质,选用缓冲系统为20mmol/L Na<,2>HPO<,4>+10mmol/L柠檬酸(pH6.2),在该pH下介质只吸附杂质,而HSA直接穿透,这样可以加快物流速度,缩短处理时间.经该步骤处理后,HSA纯度提高到90.5％,单步HSA收率为94.5％.在此后的第二步层析处理过程中,考察了阴离子交换层析和疏水层析对HSA的纯化效果,并最终采用疏水层析方法.疏水层析过程中通过综合比较Butyl SepharoseFF, Octyl Sepharose FF, Phenyl Sepharose FF这三种疏水介质,最终选用了Butyl Sepharose FF,该介质疏水性适中,可以保证温和条件下洗脱HSA,选用的缓冲系统为20mmol/L Na<,2>HPO<,4>/ NaH<,2>PO<,4>(pH6.2).该过程采用的纯化策略是先以高盐缓冲液平衡层析柱使HSA吸附,然后通过逐级降低缓冲液盐浓度的方式先洗脱杂蛋白,最后使HSA脱附.本工艺如能进行条件的进一步优化,特别是疏水层析步骤洗脱条件的优化,则整个工艺的总收率还有进一步提高的空间.与传统冷乙醇工艺相比较,该工艺最终产品纯度更高,收率也有相当保证,生产周期相对较短,且层析过程可以在常温下操作,易实现自动化控制,从而降低了劳动强度.