微纳流控芯片蛋白质富集分离新方法研究

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微流控芯片的发展顺应了生化分析发展的微型化、集成化和自动化的整体趋势。通过多种操作单元的灵活组合和规模集成,可实现样品的快速、准确、高效分析。近年来,随着纳米加工技术的不断发展,许多研究者将纳米结构融入微流控芯片,利用纳米通道的特殊性能对生物样品进行预处理、分离和检测,扩展了微流控芯片的应用领域,也符合蛋白质组学研究发展的需要。在蛋白质组学研究中,由于蛋白质样品复杂,表达丰度差异极大,多数蛋白因含量极低难以被检测,因此需要进行有效的预富集以满足检测需求。本文构建了一个微纳流控芯片富集系统,选用阳离子选择性的Nafion树脂在垂直PDMS芯片微通道方向加工纳米孔道结构,利用纳米结构的排斥富集效应实现小分子和蛋白质的富集。实验中,以负电性的荧光素、FITC-BSA和FITC-IgG为对象,采用汞灯诱导荧光检测系统,分别对缓冲液离子强度、电场强度条件等影响因素进行了优化。结果表明,30min内0.1fM级的荧光素和蛋白质的富集系数可达1010以上,富集系数随初始浓度的降低而增大,该系统可有效应用于蛋白质的在线预富集。在此基础上建立了微纳流芯片富集-毛细管分离检测系统,在PDMS上下层设计高度不同的微通道作为毛细管与芯片的接口,利用PDMS的弹性实现毛细管与芯片的连接。结果表明,芯片与毛细管可成功连通,接口处无样品漏流现象。初始浓度为0.33nM的FITC-IgG溶液经芯片富集后切换电压,浓缩带可被毛细管电泳分离,富集系数在102以上,为后续质谱检测提供了样品预处理的新方法。
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