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目的:研究形觉剥夺性近视眼巩膜、脉络膜、视网膜中乙酰胆碱M1受体基因的表达,明确M1受体在后极部眼球壁的分布及其在近视形成中的作用;体外培养豚鼠巩膜细胞,明确乙酰胆碱M1受体在巩膜细胞中的表达,研究哌仑西平对细胞M1受体的表达量、细胞增殖和Ⅰ型胶原合成量的影响,探讨哌仑西平抑制近视的机制。 方法:选健康、双眼屈光度相同的4周龄豚鼠30只,随机选一眼戴不透明眼罩进行遮盖,为治疗组:另一眼为对照,组成对照组。实验前、后用检影验光法测量治疗组和对照组的屈光度,用A超测量眼轴长度。遮盖2周后过量麻醉法处死动物,摘除眼球,用电子天平测量眼球重量,去除赤道前的组织及玻璃体,分离视网膜、脉络膜和巩膜组织,分别提取视网膜、脉络膜、巩膜组织的RNA,用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测视网膜、脉络膜、巩膜组织中M1受体mRNA的表达,并分析治疗组和对照组间M1受体mRNA表达量的差异,以β-actin为内参照。用配对比较的t检验分析治疗组与对照组间屈光度、眼轴长度、眼球重量和mRNA相对含量的差异。 选健康4周龄豚鼠5只,用组织块培养法培养后极部巩膜细胞。用免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定。取原代培养的巩膜细胞和第7代巩膜细胞,提取细胞总的RNA,用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测M1受体mRNA,并比较表达量的差异,以β-actin为内参照。取第7代巩膜细胞,加入哌仑西平,使终浓度为10-3M,48h后提取巩膜细胞总的RNA,用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测10-3M哌仑西平治疗组和对照组间M1受体mRNA量的差异。