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研究背景:RNA结合基序蛋白3(RNA binding motif protein 3,RBM3)是高度保守的RNA结合蛋白家族一员,能够保护细胞生理活动的正常进行。正常细胞在受到低温、低氧等刺激时,RBM3表达会显著上调来保护细胞免遭不利条件引起的死亡。研究表明,RBM3在胃癌、食管癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等多种类型的癌症中异常表达,且与癌症患者多项临床指标和生存预后密切相关,这提示我们,RBM3可能在癌症进程中发挥着重要作用。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞失去细胞形态和胞间粘附能力而获得间充质细胞表型的生物学过程,肿瘤细胞一般通过该过程来获得迁移和侵袭能力。大量研究报道表明RBM3可以调控多种类型肿瘤细胞的迁移和侵袭,提示我们RBM3可能在肿瘤细胞EMT过程中扮演着重要角色。作为四种最常见的癌症之一,肝癌的发病率和死亡率始终处于较高水平,但RBM3在肝癌中的作用目前还缺乏相应的研究。因此在本文中,我们以肝癌为研究背景,探究了RBM3在肝癌中的临床意义以及对肝癌细胞EMT过程的影响。研究内容:检测90位肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织中RBM3表达情况,根据患者病理信息对肝癌患者各项病理参数进行统计分析,探究RBM3与肝癌患者预后的关系;分别通过过表达或敲低RBM3表达来探究RBM3对肝癌细胞EMT过程以及肝癌细胞迁移和侵袭的影响;通过软件预测RBM3结合靶点,探究预测靶点对RBM3的调控作用。研究方法:利用免疫组织化学技术检测RBM3在肝癌以及癌旁组织中表达,采用Western Blot实验检测EMT相关蛋白的表达,应用Transwell实验检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,采用Western Blot和双荧光素酶报告基因检测系统探究miR-383对RBM3的调控作用实验结果:(1)RBM3在肝癌中高表达,且与肝癌患者年龄、生存状态、病理分级和复发情况密切相关;高表达RBM3的肝癌患者五年相对生存率明显低于低表达RBM3的肝癌患者,表明RBM3高表达是肝癌患者预后不良的独立因素。(2)MHCC97H肝癌细胞中RBM3表达水平明显高于HepG2肝癌细胞。在HepG2肝癌细胞中过表达RBM3,可以促进EMT标志蛋白MMP2、MMP9和VEGF的表达,同时增强细胞的迁移和侵袭能力;而在MHCC97H肝癌细胞中敲低RBM3表达,可以抑制EMT标志蛋白MMP2、MMP9和VEGF的表达,同时抑制细胞的迁移和侵袭能力。(3)通过TargetScan数据库预测RBM3可能的调控靶点,发现miR-383可以与RBM3 3’UTR第41-47位碱基互补配对。利用Western blot探究miR-383对RBM3蛋白表达的影响,发现miR-383可以抑制肝癌细胞中RBM3表达。利用双荧光素酶报告基因检测系统来探究miR-383调控RBM3表达的具体机制,结果显示miR-383确实可以与RBM3 3’-UTR第41-47位碱基结合从而调控RBM3表达。说明miR-383是RBM3的上游调控靶点,可以调控肝癌细胞中RBM3表达。实验结论:(1)RBM3在肝癌中高表达,且RBM3高表达是肝癌患者预后不良的独立因素。(2)RBM3诱导肝癌细胞EMT过程的发生,促进肝癌细胞的迁移和侵袭。(3)microRNA-383调控肝癌细胞中RBM3表达,是RBM3上游调控靶点。