目的:T细胞是机体内主要的适应性免疫细胞,在炎症、自身免疫性疾病以及肿瘤发生、发展中发挥着重要作用。T细胞在其发育、分化以及效应的过程中伴随着细胞活化与增殖,需要内质网合成大量的蛋白质。在蛋白质的合成过程中,伴随着错误折叠或未折叠蛋白的产生,机体可通过内质网相关降解复合体（endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD）、自噬-溶酶体途径与未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）处理这些错误折叠蛋白,维持分泌蛋白的稳态平衡。哺乳动物Lin-12抑制子/增强子（lin-12-like suppressor/enhancer,Sel1L）是ERAD中E3-泛素连接酶家族羟甲基戊二酰基还原酶降解蛋白1（hydroxymethylglutaryl reductase degradation protein 1,Hrd1）的接头蛋白,在内质网稳态的维持中必不可少。本文通过构建T细胞内特异敲除Sel1L基因的小鼠模型,以期探究Sel1L分子在T细胞发育成熟过程中的作用。方法:1.磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏na?ve CD4⁺T细胞,用anti-CD3/CD28抗体活化T细胞,运用Western blot技术分析T细胞活化前后细胞增殖时,内质网反应性和自噬-溶酶体水平。2.运用Cre-loxp重组酶系统,构建T细胞特异性敲除Sel1L基因的小鼠模型:将C57BL/6背景的Se1lL^f/f小鼠与Lck-Cre^+/-小鼠繁育,通过聚合酶链式反应（PCR）技术与琼脂糖凝胶电泳技术鉴定子代小鼠基因表达,同时具有Lck-Cre^+/-Sel1L^f/f的小鼠即为T细胞特异性敲除Sel1L基因的实验鼠（Knockout,KO）,而其同窝对照Lck-Cre^-/-Sel1L^f/f的小鼠则为野生型小鼠（Wildtype,WT）。3.取8-10周龄的WT和KO小鼠,称量体重,评估小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结形态,并运用流式细胞术初步分析CD4⁺T和CD8⁺T细胞的分群情况。4.运用流式细胞术进一步分析T细胞特异性敲除Sel1L基因对胸腺中T细胞发育不同阶段胸腺细胞比例、增殖和凋亡的影响。采用流式细胞分选技术分选WT和KO小鼠的胸腺中双阳性T细胞,加入anti-CD2/TCR-β体外诱导双阳性T细胞继续发育为单阳性T细胞,评估其发育效能。5.运用流式细胞术分析WT和KO小鼠脾脏中不同活化阶段的T细胞比例,以及CD4⁺T细胞的活化与凋亡比例,同时评估iTreg细胞比例。结果1.T细胞活化后,细胞增殖时,内质网反应性与自噬-溶酶体活性均上调。2.成功构建T细胞特异性敲除小鼠的模型。3.KO小鼠与WT小鼠相比免疫器官重量和细胞总数并没有明显差异。4.Sel1L基因敲除后小鼠胸腺DN细胞增多,T细胞发育阻滞在DN3期,胸腺中DP期以及CD3⁺CD4⁺SP细胞比例降低;处于未成熟状态的胸腺细胞比例增加,nTreg细胞比例减少,但是γδT细胞发育不受影响,细胞比例增加;DN期细胞增殖与凋亡比例均上调,而DP细胞增殖减少,TCR-β⁺CD4⁺SP细胞增殖凋亡并无明显改变;体外培养实验中KO小鼠DP细胞向SP细胞发育效能降低。5.KO小鼠脾脏中CD4⁺效应细胞增多,活化与凋亡细胞比例也升高,但对外周免疫器官中iTreg的比例影响不大。结论:在T细胞中特异性敲除Sel1L基因,可致胸腺T细胞发育阻滞在DN3期,DN细胞增加,DP细胞减少,CD3⁺CD4⁺SP细胞减少,说明Sel1L基因对于早期T细胞发育过程有影响。