东方伊萨酵母YP-1降解染料活性艳红K-2BP的蛋白质组学研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:girljiangsha
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染料废水属于一类持久性难降解有机废水,目前已成为环境重点污染源之一。本文选用了合成染料中品种和数量最多的一类偶氮染料作为研究对象,在本实验室前期研究工作基础上,初步探讨了具偶氮染料降解能力的东方伊萨酵母菌Issatchenkia orientalis YP-1对偶氮染料活性艳红K-2BP的脱色性能及脱色酶系,并借助双向电泳、质谱分析等蛋白质组学分析方法,构建了酵母菌在不同浓度染料活性艳红K-2BP胁迫下的蛋白质表达谱,并对差异蛋白的质谱鉴定结果进行了分析与讨论,获得了如下结果:   1.东方伊萨酵母菌YP-1能对不同浓度(从50 mg/L到1000 mg/L)活性艳红K-2BP有不同程度的脱色,脱色率随染料浓度的增加而降低,表明染料浓度越高对酵母菌抑制作用越大。通过对比该菌株YP-1的胞内酶和胞外酶对染料活性艳红K-2BP的脱色效果,得出其胞内酶对染料脱色起主要作用。   2.通过比较和优化蛋白样品制备和双向凝胶电泳的关键环节和电泳参数等条件,建立了一套完整的适合本研究的双向电泳条件。结果显示了采用硫酸铵沉淀法制备样品,用固相pH4-7梯度胶条进行等点聚焦,上样量150μg,电泳结束后硝酸银染色,最终可获得分辨率高和重复性好的双向电泳图谱。   3.运用优化好的双向电泳条件构建双向电泳图谱,并借助Imagemaster2DElite6.01分析软件进行图像分析得到36个差异蛋白,其中有11个上调表达,25个下调表达。然后结合MALDI-TOF/TOF-MS质谱技术鉴定蛋白,并进行数据库检索,最终获得了10个功能已知的差异蛋白和5个功能未知的差异蛋白,对已知蛋白功能的分析结果显示这些蛋白都是一些保护酶以及与抗氧化代谢相关的蛋白,当酵母细胞受到染料的胁迫时,这些蛋白的表达就会受到不同程度的影响。  
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