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目的:c-Met蛋白与肿瘤细胞的生长、增殖、迁移、侵袭及凋亡的保护等密切相关。本实验研究通过建立体外热疗残癌细胞HepG2模型,模拟肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)经射频消融(radiofrequency ablation,RFA)治疗后残留癌细胞,利用免疫细胞化学方法检测热疗后残留癌细胞中c-Met蛋白的表达变化,旨在探讨高温热疗对残癌细胞c-Met蛋白表达的影响,明确c-Met蛋白对残癌细胞的作用,为RFA后HCC复发转移的机制和以c-Met为目标靶点的药物研究提供理论依据与实验基础。方法:1、将HePG2细胞放入正常浓度210 mL/L氧气、50g/L二氧化碳、饱和湿度以及37°C的培养箱中培养。培养液为含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基,隔日更换培养液。人肝癌细胞HepG2呈贴壁生长。实验所用细胞均处于对数生长期。2、实验组体外热疗残余癌细胞模型的建立:将对数生长期的HePG2细胞置于含正常浓度210 mL/L氧气、50g/L二氧化碳及饱和湿度的细胞培养箱内。培养液为含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基。通过调整培养箱的温度使其分别达到41℃、45℃、50℃,根据培养温度的不同,再依次分为A、B、C三个组,各于6 hs、12hs、24 hs、48 hs观察HePG2细胞生长情况,残留癌细胞进行后续实验。3、对照组残癌细胞模型的建立:将对数生长期的HePG2细胞置于含正常浓度210 mL/L氧气、50g/L二氧化碳及饱和湿度的细胞培养箱内。培养液为含10%胎牛血清的dmem细胞培养基。保持培养箱的温度为37℃,于6hs、12hs、24hs、48hs观察hepg2细胞生长情况,残留癌细胞进行后续实验。4、免疫细胞化学方法检测各组hepg2残癌细胞c-met蛋白的表达。5、spss软件统计学分析:(1)采用χ2检验比较实验组a、b、c两两间c-met蛋白表达阳性率的差异;(2)采用χ2检验比较各实验组与对照组间c-met蛋白表达阳性率的差异。(p<0.05)结果:1、经免疫细胞化学方法检测,在光镜下c-met蛋白阳性细胞为hepg2胞膜呈棕黄色染色,而胞核不染色。2、c-met蛋白在体外热疗残癌细胞模型实验组a、b、c中表达的阳性率依次为33.2%、35.7%、36.5%。虽然三者阳性率都升高,但a与b、b与c、a与c之间依次比较,差异在统计学上都没有意义(pab=0.144>0.05,pbc=0.648>0.05,pac=0.055>0.05)。说明当热疗温度高于某一值(如37℃)之后,c-met蛋白阳性表达率并不一定随温度升高而升高,与热疗温度之间无依赖性。3、c-met蛋白在体外热疗残癌细胞模型实验组a、b、c中表达的阳性率依次为33.2%、35.7%、36.5%,对照组中c-met蛋白表达的阳性率为10.5%。a与对照组比较差异有统计学意义(pa<0.001),b与对照组比较差异有统计学意义(pb<0.001),c与对照组比较差异有统计学意义(pc<0.001)。与对照组相比,实验组中残癌细胞c-met蛋白表达的阳性率更高,说明热疗能促进残癌细胞c-met蛋白的表达。结论:1、体外热疗残癌细胞hepg2中c-met蛋白表达的阳性率更高,高温热疗可以促进残癌细胞c-met蛋白的表达。2、c-met蛋白可能成为提示肝细胞癌复发、转移及疗效的一个新的生物标志物。