甲氧滴滴涕(methoxychlor MXC)是环境内分泌干扰物的一种,化学名为二甲二苯三氯乙烷,作为滴滴涕的替代物广泛使用,在土壤、河流、动植物体内、人体体液,甚至孕妇血液、胎盘、脐血、新生儿体内都检测到了甲氧滴滴涕。滋养细胞(cytotrophoblast CT)是构成胎盘的主要细胞,包括绒毛外和绒毛滋养细胞两个亚型,其侵袭、免疫耐受、增殖分化、激素合成、物质代谢等生物学功能是妊娠发生、维持的必要条件。动物实验发现甲氧滴滴涕可以造成不孕、流产率增加,因此研究甲氧滴滴涕对滋养细胞生物学功能的影响具有重要意义。本研究为滋养细胞亚型的原代培养、鉴定后用侵袭小室、RT-PCR、Western-blot、放射免疫等方法研究甲氧滴滴涕对其侵袭能力、免疫耐受以及激素合成等生物学功能的影响。研究目的:1研究MXC对绒毛外滋养细胞侵袭能力的影响2研究MXC对绒毛外滋养细胞免疫耐受功能的影响3研究MXC对绒毛滋养细胞HCG、P合成的影响研究方法:1用胰蛋白酶消化法得到单细胞悬液后流式细胞仪分选出滋养细胞亚型。光镜,激光共聚焦,透射电镜鉴定。2.使用侵袭小室检测空白对照组与1μmol/L甲氧滴滴涕处理组培养24h后绒毛外滋养细胞侵袭能力变化。3.Western blot检测空白对照组与1μmol/L甲氧滴滴涕处理组培养24h后绒毛外滋养细胞MMP-2、MMP-9、HLA-G蛋白表达。4 RT-PCR法检测空白对照组与1μmol/L甲氧滴滴涕处理组培养24h绒毛外滋养细胞HLA-G mRNA表达。5用放射免疫法检测空白对照组与1μmol/L甲氧滴滴涕处理组绒毛滋养细胞培养48h后HCG,、P值。结果:1胰蛋白酶消化法加流式细胞仪分选出的细胞经鉴定为绒毛外滋养细胞与绒毛滋养细胞。2甲氧滴滴涕处理组绒毛外滋养细胞穿膜细胞数与空白对照组相比减少,侵袭能力下降(t=3.509,P<0.01),有统计学意义。3甲氧滴滴涕处理组绒毛外滋养细胞与空白对照组相比MMP-9、MMP-2蛋白表达下降。4甲氧滴滴涕处理组绒毛外滋养细胞与空白对照组相比HLA-G蛋白和mRNA表达下降。5甲氧滴滴涕处理组绒毛滋养细胞合成HCG与空白对照相组比减少(t=3.079,p<0.01),有统计学意义;甲氧滴滴涕处理组绒毛滋养细胞合成P与空白对照相组比减少(t=2.159,p<0.01),有统计学意义。结论:1胰蛋白酶消化法加流式细胞仪可以分选出滋养细胞亚型。2甲氧滴滴涕可以抑制绒毛外滋养细胞侵袭能力,其机制可能是减少绒毛外滋养细胞合成MMP-2、MMP-9。3甲氧滴滴涕降低绒毛外滋养细胞HLA-G蛋白和mRNA表达。4甲氧滴滴涕可以抑制绒毛外滋养细胞合成HCG、P。