两种现代分析技术在生药研究领域中的应用——以厚朴和阴地蕨属为例

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扫描电镜技术是运用扫描电子显微镜来观察样品表面显微结构的电子光学技术。为了掌握此项技术在植物类生药研究领域中的应用,本研究以厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.、凹叶厚朴M. officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et Wils.及其4个近缘种(紫玉兰Magnolia liliflora Desr.、玉兰M. denudata Desr.、望春玉兰M. biondii Pampan.、荷花玉兰M. grandiflora L.)的花粉为研究对象,分别采用生物学样品扫描电镜制备中常用的戊二醛固定法、叔丁醇真空冷冻干燥法和自然干燥法对它们进行观察发现:戊二醛固定法和叔丁醇真空冷冻干燥法处理的各物种花粉粒均有不同程度地皱缩,变形明显,不宜用来观察外形、表面纹饰及测量大小;相比之下,自然干燥法处理的各物种花粉粒饱满充盈,可以满足观测要求。因此,对于厚朴、凹叶厚朴及其4个近缘种的花粉扫描电镜制样宜选用简便且经济环保的自然干燥法。此外,研究还证实了此6种花粉的形态特征既具有科属的共同特征也具有种的特异性,其中,种的特异性主要体现在花粉粒的大小和外壁纹饰的结构上:此6种花粉的大小存在极显著的统计学差异;厚朴和凹叶厚朴花粉粒表面的小穴状纹饰小且浅,均不甚明显;玉兰、紫玉兰、望春玉兰花粉粒表面的小穴状纹饰常在两极和萌发沟处连成一片变为明显的、不规则的小坑状;荷花玉兰的整个花粉粒表面密布深穴状和网状纹饰,覆盖层延伸至两极和萌发沟处常部分缺失。本研究的研究结果可为中药厚朴的孢粉学研究和种质资源研究提供新的孢粉学资料,也可为现代植物的种及亚种级水平分类提供参考。  DNA分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记形式,是DNA水平遗传多态性的直接反映。本研究基于第三类DNA分子标记技术——DNA序列的直接测定比对,以3种阴地蕨属植物的基因组总DNA为模板,分别采用已发表的通用引物和设计的特异性引物对叶绿体psbA-trnH间隔区序列和chlL基因序列进行扩增,并以GeneBank中同时发表了psbA-trnH间隔区序列和chlL基因序列的22种蕨类植物作为相关类群,以3种石松类植物作为外类群,采用邻接法构建系统发育树并探讨它们之间的系统发育关系,以期为国产阴地蕨属植物系统发育关系的重建筛选出合适的分子标记。研究证实,psbA-trnH间隔区序列不易于解析亲缘关系较远的物种,而 chlL基因序列可能在种及以上水平上均具有较高的分辨率。研究还发现阴地蕨种内chlL基因序列的2种单倍型在某些样品中的分布与psbA-trnH序列的2种单倍型在这些样品中的分布并不平行,因此,联立这两个分子标记可能有助于提高国产阴地蕨属属内各物种之间的分辨率。本研究的研究结果可为进一步探索国产阴地蕨属属内各物种之间的系统发育关系奠定基础。
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