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本研究通过对与母猪乳腺葡萄糖转运以及乳糖合成有重要调控作用基因的研究,旨在为母猪泌乳调控提供理论依据。试验选取第3到6胎纯种大白母猪6头,在母猪产前第17天、泌乳第1天及第17天进行活体乳腺组织取样。采用荧光定量PCR方法测定了乳腺葡萄糖转运以及乳糖合成相关基因:GLUT1、GLUT8、SGLT1、SGLT3、SGLT5、AKT1、PRLR、HK1、HK2、LALBA、β4GALT1在乳腺发育和泌乳不同阶段mRNA表达丰度;使用免疫荧光化学和蛋白印记分析方法检测葡萄糖转运以及乳糖合成关键基因GLUT1、β4GALT1在乳腺中的组织定位及其蛋白质水平的表达;通过构建母猪乳腺细胞AKT1过表达模型研究其对乳腺葡萄糖转运的调控作用。 结果表明: 1.母猪乳腺组织表达的葡萄糖转运载体主要有GLUT1、GLUT8、SGLT1、SGLT3、SGLT5。GLUT1 mRNA以及蛋白表达量泌乳阶段极显著高于产前第17天(P<0.01),泌乳第17天表达量极显著高于泌乳第1天(P<0.01);SGLT1 mRNA表达量泌乳第17天显著高于产前第17天以及泌乳第1天(P<0.05),泌乳第1天较产前第17天表达量有所提高但差异不显著;GLUT8、SGLT3、SGLT5 mRNA表达量从产前第17天到泌乳第1天、第17天表达量逐渐降低,其中SGLT3 mRNA表达量泌乳期显著低于产前第17天(P<0.05)。 2.母猪乳腺组织乳糖合成酶LALBA及β4GALT1的mRNA表达量从产前第17天到泌乳第1天、第17天逐渐增高。泌乳第17天LALBAmRNA表达量极显著高于产前第17天以及泌乳第1天(P<0.01),泌乳第1天LALBAmRNA表达量极显著高于产前第17天(P<0.01)。β4GALT1 mRNA以及蛋白表达量泌乳阶段(泌乳第1天、第17天)极显著高于妊娠阶段(产前第17天)(P<0.01);泌乳第17天β4GALT1的mRNA以及蛋白表达量显著高于泌乳第1天(P<0.05); 3.免疫荧光结果显示,产前第17天可见到乳腺上皮细胞细胞质膜有少量GLUT1表达,泌乳第1天主要表达于乳腺上皮细胞基底侧以及细胞质中,泌乳第17天GLUT1主要表达于乳腺导管上皮细胞胞质以及基底膜。产前第17天可以观察到乳腺细胞胞质β4GALT1的表达,泌乳第1天母猪乳腺组织腺泡结构明显且β4GALT1主要表达于乳腺腺泡上皮细胞,泌乳第17天β4GALT1在乳腺上皮细胞顶膜及胞质中大量表达。 4.母猪乳腺组织中PRLR、AKT1、HK1、HK2基因mRNA水平从妊娠到泌乳阶段表达上调。其中AKT1、HK1 mRNA表达丰度泌乳阶段显著高于妊娠阶段(P<0.05),泌乳第17天高于泌乳第1天,但差异不显著。PRLR mRNA丰度泌乳第17天高于泌乳第1天以及产前第17天,泌乳第1天高于产前第17天,但差异不显著;HK2 mRNA表达丰度在泌乳第1天达到最大,显著高于产前第17天及泌乳第17天(P<0.05)。 5.构建真核过表达载体pcDNA3.1(+)-AKT1,转染乳腺细胞,结果显示,乳腺细胞AKT1过表达显著提高GLUT1、HK1、HK2的mRNA表达水平(P<0.05)。 以上研究结果提示,母猪乳腺从妊娠到泌乳阶段葡萄糖转运以及乳糖合成相关基因表达均表现出差异。葡萄糖转运主要载体以及乳糖合成酶相关基因在泌乳期均通过上调表达为乳腺正常泌乳做好准备。