冻融抗原负载的DC-CIK细胞对SKOV3的杀伤作用

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目的:探讨负载人卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原(Ag)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后,对DC及CIK细胞增殖的影响;探讨与负载人卵巢癌细胞株SKOV3或COC1冻融Ag的DC共培养的CIK细胞对SKOV3杀伤作用的影响。方法:选择12例上皮性卵巢癌患者,分离其外周血,获得单个核细胞(PBMC),用相应的诱导因子体外诱导出DC与CIK细胞。分别收集处于对数生长期的SKOV3及COC1细胞,用细胞冻融法提取Ag,并于DC培养的第5天将Ag加入DC中培养,使之成为负载Ag的DC。将经Ag负载的DC与未经Ag负载的DC分别和CIK细胞共培养后分组:实验组:将经Ag负载的DC与CIK细胞共培养作为实验组(SKOV3Ag-DC+CIK组、COC1 Ag-DC+CIK组)。对照组:(1)将未经Ag负载的DC与CIK共培养作为对照组1(DC+CIK组);(2)CIK细胞单独培养作为对照组2(CIK组);(3)DC单独培养作为对照组3(DC组);(4)负载抗原的DC为对照组4(Ag-DC组)。自培养第1天到第20天,用台盼兰拒染法动态监测CIK细胞的增殖情况,观察DC及Ag负载的DC对CIK细胞增殖的影响。用流式细胞技术分析DC组、SKOV3Ag-DC组、SKOV3Ag-DC-CIK组中DC细胞的表型,观察负载Ag及CIK对其增殖的影响。分析CIK组、DC-CIK组、SKOV3Ag-DC-CIK组中CIK细胞表型,观察DC及Ag-DC对CIK细胞增殖的影响。用乳酸脱氢酶释放法检测CIK组、DC-CIK组、Ag-DC-CIK组(包括SKOV3-DC-CIK及COC1 -DC-CIK组)对SKOV3的杀伤活性,对比观察DC、SKOV3Ag-DC及COC1Ag -DC对CIK细胞杀伤活性的影响。结果:与DC共培养后的CIK细胞的增殖速率大于单CIK细胞,但与同负载抗原的DC共培养的CIK细胞增殖率相比,差异无统计学意义(P>0.05);Ag-DC-CIK组中DC细胞成熟表型高于DC组及Ag-DC组(P<0.01);Ag-DC-CIK组中CIK细胞成熟表型高于CIK组及DC-CIK组(P<0.01);SKOV3-DC-CIK组对SKOV3杀伤率高于CIK组、DC-CIK组及COC1-DC-CIK组(P<0.01)。结论:(1)DC及负载SKOV3冻融Ag的DC与CIK共培养可促进DC、CIK细胞的成熟,但负载SKOV3冻融Ag的DC与DC相比,不能明显提高CIK细胞的增殖率;(2)负载SKOV3冻融Ag的DC可增强CIK细胞对SKOV3的特异性杀伤作用。
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