本课题通过建立大鼠VILI模型,研究TRPA1介导的神经源性炎症反应在机械通气肺损伤中作用,具体如下：1大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)动物模型的建立SPF级雄性SD大鼠60只,实验前禁食12h、自由饮水,随机分组A对照组、B小潮气量组、C大潮气量组后,腹腔注射10%的水合氯醛3.5ml/kg麻醉,颈部正中切开置入气管导管,除A组外,均接小动物呼吸机。腹主动脉放血处死大鼠,立即开胸,钳加右主支气管,收集左侧肺组织,称湿重,置烤箱80℃干燥至恒重,测定不同组的肺湿／干重(W/D)。经气管灌入4%多聚甲醛以固定右侧肺组织,石蜡切片HE染色后,观察不同组肺组织病理学变化。结果A对照组肺组织表面光滑,无出血；HE染色观察肺泡壁结构完整,由单层肺泡上皮细胞构成,肺泡内无炎细胞浸润、无出血等病理现象；B小潮气量组肺泡内无出血现象,但肺泡壁稍增厚,并伴有少量炎症细胞出现；C大潮气量组肺表面有点状出血,肺泡壁增厚,肺泡内有轻到重度的炎细胞浸润,并产生肺泡出血、肺不张。所测定的数据与A组比较,B组W/D值无明显变化,C组W/D值升高。与B组比较,C组W/D值升高。证明大潮气量(40ml/kg)的机械通气会导致大鼠肺组织损伤严重,可成功的建立呼吸机相关肺损伤大鼠动物模型。2TRPA1介导的神经源性炎症反应参与VILI的研究SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只：A正常对照组气管切开自主呼吸4h；B小潮气量组VT7ml/kg,RR40次/min,通气4h；C大潮气量组VT40ml/kg,RR40次/min,通气4h。B、C两组收集BALF与右肺中上叶。经测定：(1)与A组比较,B组(VT7ml/kg)与C组(VT40ml/kg)的WBC含量、肺灌洗液总蛋白含量、MPO活性、MDA含量上升(p<0.01)；而SOD活性只在大潮气量组C组中显著下降(p<0.01),在小潮气量的B组则没有明显变化。(2)小潮气量的B组与大潮气量的C组TNF-α与IL-8指标显著上升(p<0.01)。(3)小潮气量的B组与大潮气量的C组SP指标含量显著上升(p<0.01),而与B组对比,C组的SP指标也显著上升(p<0.01)。(4) RT-PCR结果显示TRPA1在大鼠肺组织表达,且各个处理后,其表达量基本保持不变。因此,本研究认为大潮气量机械通气导致大鼠肺组织损伤尤为明显；TRPA1介导的神经源性炎症反应参与了机械通气性肺损伤,在VILI发生机制中其重要作用。TRPA1参与机械通气性肺损伤的不是以表达量变化的方式参与,很有可能机械性通气通过想象TRPA1蛋白的活性参与了肺损伤。3.拮抗剂对TRPA1介导的神经源性炎症反应参与的VILI的影响SPF级雄性SD大鼠50只,随机分为5组(10只/组)：A正常对照组气管切开自主呼吸4h,B小潮气量组VT7ml/kg, C大潮气量组VT40ml/kg,D小潮气量组VT7ml/kg+拮抗剂HC-030031,E大潮气量组VT40ml/kg+拮抗剂HC-030031,各组RR40次/min,通气4h。经测定：1)与A组比较,大潮气量E组VT40ml/kg在有拮抗剂HC-030031添加的情况下,WBC含量、肺灌洗液中总蛋白、MPO活性、MDA含量比未添加的C组显著性降低,SOD活性比未添加的C组提高；小潮气量D组VT7ml/kg即便添加拮抗剂HC-030031,以上指标基本保持不变；2)大潮气量并添加拮抗剂E组的TNF-α与IL-8含量分别存在不同程度的降低趋势；3)添加了拮抗剂的E组SP指标含量下降。因此,TRPA1拮抗剂HC-030031有效的改善肺部组织的氧化-抗氧化平衡状态,有助于VILI症状的改善；TRPA1拮抗剂HC-030031则能够有效的抑制炎症反应；机械性通气可能并非影响TRPA1在迷走神经传入纤维中表达量的增加,而是影响TRPA1蛋白活性,诱导神经性炎症反应,加重了肺部损伤,TRPA1可以作为,对VILI的治疗和预防提供分子生物学依据。