小菜蛾中肠Cry1Ac毒素结合蛋白的分离及鉴定

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目前世界上微生物杀虫剂中用途最广、产量最大的是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt),在世界范围内得到广泛的应用。小菜蛾Plutella xylostella (L.)是十字花科蔬菜的重要害虫,也是最早发现的对Bt产生抗药性的田间种群,其抗药性仍在增长。本研究利用蛋白质组学的方法分离和分析了小菜蛾中肠Cry 1 Ac毒素的结合蛋白,探讨该小菜蛾品系对Bt毒蛋白产生抗性的可能机制。主要结果如下:比较了小菜蛾取食不同的植物对其生长的影响,结果表明,用甘蓝苗与萝卜苗相结合的方法比单独用甘蓝苗或萝卜苗的饲养方法好,用甘蓝苗与萝卜苗相结合的方法饲养的小菜蛾种群数量更高,发育更整齐。通过Cry 1 Ac毒素和Bt制剂的对不同的小菜蛾种群进行汰选,获得Cry 1 Ac毒素抗性倍数为998.21和35.07的两个小菜蛾抗性种群,和一个Bt制剂性倍数为91.32倍的小菜蛾抗性种群。应用蛋白质组学的方法,通过应用双向电泳、质谱检测和活性功能检测来研究小菜蛾中肠CrylAc结合蛋白。结果表明小菜蛾BBMV的蛋白分子量位于120KD以下,等电点在pH4-7之间,首次鉴定得到小菜蛾中肠6种的Cry1Ac结合蛋白,其中抑制蛋白WHP、NADH脱氢酶铁硫蛋白3前体、NADH脱氢酶铁硫蛋白3为已报道蛋白,其余3种为新蛋白。
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