本论文以课题组测序获得杂色鲍的核酸序列和Gen Bank数据库为基础,经过生物信息学分析初步筛选,利用定量PCR获得186个变态差异表达基因。根据差异表达基因在面盘幼虫(VE)、匍匐幼虫(CR)和变态后稚鲍(JU)的表达情况,利用Cytoscape构建这些差异表达基因的作用网络。发现TH信号通路在作用网络中具有重要作用。利用RNAi等初步分析了TH信号通路在变态过程中的作用。具体结果如下:1)对筛选获得的186个差异基因进行GO注释和聚类分析。注释结果显示,这些差异基因编码包括含铁蛋白、核糖体蛋白、激素类蛋白、新陈代谢相关酶、细胞凋亡相关蛋白、细胞周期蛋白以及一些转录因子等。其中与细胞、细胞器、大分子复合物等属于细胞组分的序列最多。2)采用Genorm、norm Finder和Ref Finder软件分析EIF5A、OAZ1、YB1、RPL3、RPS9和ACT等6个候选内参,在VE、CR和JU期三个时期以及RNAi条件下的VE期的表达稳定性。结果表明,在幼虫的VE、CR和JU期,EIF5A为最合适的内参基因;而在RNAi实验中最佳内参为RPS9。3)方差分析186个差异表达基因的表达谱,表明有106个基因具有显著性地表达差异。接着对这106个基因进行功能分类,发现:参与免疫/应激反应的基因最多,有23个;参与蛋白质翻译过程和细胞代谢过程的基因也较多,都为13个;与细胞周期相关的基因有12个;另外膜蛋白有10个,转录因子有9个,与染色体组成相关的基因也有9个,与钙离子结合的有8个,与神经系统有关的基因7个,未知基因2个。利用Cytoscape构建了部分基因的作用网络。以上结果表明,杂色鲍幼虫的变态反应是一个复杂的生物学过程,有众多基因和信号通路参与,形成一个复杂的分子网络。其中TH信号通路可能在网络中具有重要作用。4)对TH信号通路相关基因在VE、CR和JU期的表达谱进行整理分析TPO、TPO-1、IDIII、Intergrinαv和TRβ在变态过程中表达量具有显著性差异(P<0.05)。,发现TPO基因在面盘幼虫期表达量最高,随后其表达量下降;TPO-1的表达量在面盘幼虫期出现大幅度上升,随后也下降;IDⅢ基因在变态后稚鲍表达量最高,且显著高于另外两个时期(P<0.05);Integrinαv基因与IDⅢ的表达趋势一样,在变态后稚鲍表达量最高,且也显著高于前两个时期(P<0.05);而TRβ在整个变态过程中的表达呈下降趋势,且三个时期的表达量都呈现显著性差(P<0.05)。5)配置三个不同浓度的T3溶液(分别为10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L),用于处理面盘幼虫。结果表明,T3诱导能够显著影响幼虫的变态率(P<0.05),其中10-6mol/L的T3显著提高幼虫的变态率(P<0.05),而10-7mol/L、10-5mol/L浓度时效果则不显著(P>0.05)。6)运用SMART-RACE技术克隆TRβ基因序列,其c DNA全长为1829bp,编码399个氨基酸。其氨基酸序列中,具有两个核受体家族的重要功能域——DBD和LBD。多重比对以及系统进化分析发现,其DBD和LBD功能域是高度保守的。7)体外合成TRβ-ds RNA,RNAi面盘幼虫。干扰6小时后发现,实验组(TRβRNAi)幼虫的变态率显著降低,与阴性对照组(EGFP RNAi)和空白对照组(Non-treated)形成显著差异(P<0.05);实验组幼虫的死亡率则显著提高,与两对照组形成极显著性差异(P<0.01)。这表明,TRβ基因沉默后对杂色鲍变态期幼虫的变态率和死亡率产生极大的影响。8)利用q PCR检测在TRβ基因沉默后TH信号通路相关基因的表达情况。结果显示,与对照组相比,表达量显著降低(P<0.05)的基因有TRβ、HIF-1α、STAT1和CCND1,其中TRβ、HIF-1α和STAT1基因在TRβRNAi后表达量极显著降低(P<0.01);大多数基因如IntegrinαV、IDⅢ、β-catenin、PI3K、AKT、ERK、Src K、GSK、TRAP、TPO和TPO-1,其表达量变化差异不显著。TRβ基因在RNAi后其表达水平极显著降低,说明杂色鲍变态期幼虫经TRβ-ds RNA处理后,该基因表达沉默,干扰效果显著。