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目的:聚乳酸（PLA）具有良好的生物相容性与生物可降解性,是常用的蛋白质药物载体之一,近年来有关聚乳酸纳米微粒载体的研究受到越来越多的关注。但其内部较低的pH值导致蛋白质失活,限制了其应用。本研究旨在合成一种pH自适型的聚乳酸-多聚赖氨酸纳米蛋白载体,以满足保持所载蛋白质性质稳定和持续释放的要求。方法:经过酰胺反应将PLA与多聚赖氨酸（EPL）合成最终产物CH3-PEG-EPL-g-PLA（PEP）,用1H NMR检测该高分子共聚物的结构,采用凝胶渗透色谱法（GPC）测量PEP的分子量与多分散性。采用纳米沉淀法制备载有牛血清蛋白（BSA）的纳米粒子与不含BSA的空纳米粒子。透射电镜观察纳米粒子的结构与形态。X线光子电能谱（XPS）检测纳米粒子表面的氮含量。Zeta电位仪检测纳米粒子的Zeta电位。观察PEP纳米粒子的吸水增重率及降解,体外BSA释放及其动力学。MTT法检测不同浓度PEP52纳米粒子作用下HL-7702细胞活性情况。通过尾静脉注射的方法在昆明小鼠体内观察PEP纳米粒子与EPL的急性毒性反应。采用比率法测定PEP纳米粒子内部的pH值,圆二色谱法观察PEP纳米粒子所释放的BSA的稳定性,在50只昆明小鼠体内观察载有BSA的PEP纳米粒子的体内分布与药代动力学。结果:双亲性梳状多聚共聚物PEP的1H NMR谱显示,合成的PEP多聚共聚物含有PLA与EPL成分。透射电镜观察见采用纳米沉淀法制备的纳米粒子呈均匀球形结构,未发生聚集。X线光电子能谱测得随着PEG分子量的增加,纳米粒子表面的氮含量比例下降,当PEG分子量大于5 kDa时,未检测到氮成分,表明PEG片段位于纳米粒子表面,而PLA与EPL则相互缠绕形成纳米粒子的核心。Zeta电位仪测得,随着PEG分子量从0 kDa增加至10 kDa,PEP纳米粒子的Zeta电位从48.62mV下降至21.17mV,而纳米粒子大小从直径84.55 nm增大到130.57 nm,这些结果均表明纳米粒子的核心之外由PEG包绕。PEP52纳米粒子的吸水增重率（112.7%）较PLA纳米粒子者（101.8%）高。随着PEP中PEG分子量从2 kDa（PEP22）增加至10 kDa（PEP102）,相应纳米粒子的吸水增重率自110.8%增加至135.1%。PLA纳米粒子在前48小时有明显的爆发性释放,但是在48小时以后,从PLA纳米粒子释放的BSA量少于PEP纳米粒子。细胞毒性和急性毒性实验显示,不同浓度PEP52纳米粒子作用下,HL-7702细胞活性在第4天保持在80%以上。当纳米粒子浓度增高时,未见明显毒性。在14天时,尾静脉注射PEP纳米粒子的小鼠肝脏、脾脏和肾脏组织H&E染色检查未见异常。PLA纳米粒子因其产生酸性降解产物,其pH值随时间推移逐渐降低,但PEP52纳米粒子的pH值在32天内保持相对稳定。PEP52纳米粒子于第2、4、8、16、32天释放的BSA在208nm和220nm处显示峰谷,螺旋物含量分别为58.3%,57.9%,56.7%,52.4%和50.8%。但是PLA纳米粒子在32天时的螺旋物含量显著下降。在第2、4、8、16、32天释放的BSA螺旋物含量54.1%,51.6%,42.5%,36.7%和30.8%,两组差异有统计学意义。PEP52纳米粒子能够更有效地保护BSA,避免其失活。昆明小鼠体内BSA纳米载体的分布与药代动力学观察显示,PEP52纳米粒子在小鼠体内具有较长的循环时间,其在肝脏、脾脏和肾脏中的AUC0–384 h值分别为1136.978、986.809、和603.238μg/g,提示PEP52纳米粒子依次在肝脏、脾脏和肾脏中清除。结论:本研究合成的聚乳酸衍生共聚物PEP纳米粒子能够为模型蛋白BSA的持续释放提供一个稳定与适宜的pH环境。PEP纳米粒子具有较好的生物相容性与较长的体内循环时间,是较为理想的生物活性蛋白载体。