胞内维甲酸结合蛋白(cellular retinoic acid binding protein，CRABP)是胞内脂结合蛋白的一种，与维甲酸(retinoic acid，RA)的生物学功能密切相关。维甲酸是一种重要的信号分子，能通过调节多种基因的转录、表达，诱导细胞的增殖、分化、凋亡。在脊椎动物中存在两类CRABPs，它们能促进维甲酸的降解或转运维甲酸到细胞核，调节基因的转录。 我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列，序列比对后推测可能是家蚕维甲酸结合蛋白基因，并首次研究了该蛋白的功能。通过RT-PCR的方法获得了该基因的ORF并与NCBI的Genbank数据库进行比对，该ORF序列与家蚕CRABP mRNA的同源性为100﹪，与其它几种无脊椎动物中CRABP的mRNA同源性为85﹪，因此我们认为此cDNA为BmCRABP (Rombyxmorti cellular retinoic acid binding protein)基因，GenBank登录号为EF112401。该基因编码132个氨基酸，其氨基酸序列与无脊椎动物中该蛋白的氨基酸序列同源性较高(达90﹪)。根据序列比对的结果和1CRABP-Ⅰ，CRABP-Ⅱ的氨基酸序列中对配体结合起重要作用的氨基酸推测BmCRABP的关键氨基酸可能是：D73、K79、D99。BmCRABP关键氨基酸的性质与CRABP-Ⅰ的比较相近，因此，推测BmCRABP的功能可能也与脊椎动物CRABP-Ⅰ的相类似，即BmCRABP与RA的降解有关。 为了研究BmCRABP的功能，将该基因的ORF克隆到载体pET-28a(+)中，重组成功原核表达质粒pET-28a(+)-CRABP，并转化感受态细胞E．coli BL21(DE3)，经IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测，与阴性对照相比在18kDa处有一特异性条带，与预期值相符。重组蛋白以可溶的形式表达，通过分子筛和亲和层析纯化了重组蛋白，并使用该重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，效价大于1∶12800。 生物信息学分析推测BmCRABP可能与RA的降解有关，因此我们研究了BmCRABP和全反式维甲酸(a11-trans retinoic acid，atRA)的关系。首先，我们重组了真核表达质粒pEGFP-Cl-CRABP，并用BmCRABP的ORF制备了RNAi用的dsRNA，用脂质体分别转染家蚕卵巢细胞Bm5后，细胞会过量表达CRABP或抑制CRABP的表达。我们用不同量的dsRNA转染细胞，atRA处理后用MTT试验检测细胞的活力，以此确定了最佳转染条件。这个试验不仅证明干扰BmCRABP的表达使细胞对RA引起的生长抑制更加敏感，同时也证明了转染的有效性。随后用pEGFP-Cl-CRABP和dsRNA分别转染细胞，MTT试验表明，当Bm5细胞过量表达CRABP时，用atRA处理后，细胞对atRA诱导的生长抑制产生耐受性；当CRABP的表达被干扰而降低时，细胞对atRA引起的生长抑制作用更加敏感。亚细胞定位分析发现，CRABP是一种细胞质蛋白，用atRA处理细胞后CRABP仍存在于细胞质中。这些数据表明，在家蚕中维甲酸结合蛋白的主要功能是影响atRA对细胞的生长抑制作用。