长白山白眉蝮蛇TLE cDNA基因片段的克隆

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蛇毒类凝血酶(Thrombin-Like Enzyme简称TLE,又称凝血酶样酶),是一种糖蛋白,属丝氨酸蛋白水解酶,可专一性地作用于纤维蛋白原,降低血液粘度,在临床上用于治疗血栓病等.长白山白眉蝮蛇是中国特有的蝮蛇,其蛇毒成分之一TLE已被纯化,并用于治疗血栓病,有效率达90%;但是该蛋白氨基酸序列迄今未报道,其编码基因尚未被克隆,为了克隆长白山白眉蝮蛇TLE cDNA基因,工作人员参照马来西来红口蝮蛇TLE cDNA基因序列,设计引物,提取长白山白眉蝮蛇毒腺总RNA,应用逆转录PCR法,获得长白山白眉蝮蛇TLE cDNA片段294bp,应用TA克隆法,克隆于pGEM-T载体上,通过测序,经NCBI核酸数据库同源性分析显示该片段与其它种蝮蛇TLE有很高的同源性,证实为长白山白眉蝮蛇TLE cDNA片段,为克隆其全长基因打下基础.
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